[发明专利]一种新布尼亚病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种新布尼亚病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包含RNA提取试剂、恒温PCR扩增反应液、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒特异性好、灵敏度高；从病毒RNA逆转录到链置换扩增全部恒定同一温度，恒温扩增仅需35分钟，核酸试纸条检测结果需2分钟左右，全程从接受样品到获得结果整个检测过程仅需1小时左右，且整个反应过程只需一个恒温仪器，特别适合新布尼亚病毒感染或蜱虫等媒介监测的快速检测使用。

主权项

一种新布尼亚病毒恒温扩增检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒组成包括：(1)RNA提取试剂；(2)恒温PCR扩增反应液：正向外围引物、反向外围引物、两条探针、两条扩增交叉引物、1×Thermol Buffer，MgSO4，dNTPs溶液，Bst DNA聚合酶，AMV逆转录酶和无菌双蒸水；所述正向外围引物为：5′‑TTGCTGCTTACAGGTTCCTG‑3′；反向外围引物为：5′‑GAGGAGCCAGCAAGACAGA‑3′；所述两条探针的序列分别为：正向5’端Biotin标记探针5′‑Biotin‑GTCCCCAGCAGAGCTGCTGAG‑3′；反向3’端Fitc标记探针5′‑Fitc‑GGGAAGAAGACAGAGTTCACAG‑3′；所述两条扩增交叉引物分别为：扩增正向引物：5′‑AGGGAATCCTTGGCCCAGATGTAAGCAGCGGCAGCAAC‑3′；扩增反向引物：5′‑TGGCCTTCAGCCACTTCACCTCAGGGATCCTCTCCATGC‑3′；(3)阳性对照：含有新布尼亚病毒的S基因片段的DNA质粒；(4)阴性对照：无菌双蒸水。