[发明专利]一种液相色谱固定相的制备方法及其糖基键合固定相

摘要

本发明涉及液相色谱固定相，为一种液相色谱固定相的制备方法及其糖基键合固定相，本发明是使用无重金属催化的“巯基-烯烃”点击化学反应制备糖基键合硅胶固定相。首先在硅胶表面引入巯基，制备巯基硅胶中间体；然后通过巯基与烯基的加成反应，将烯基糖分子键合到巯基硅胶表面。该方法为无重金属催化反应，因此最终产物中不含重金属残留，完全避免重金属对产品性能带来的不利影响。制备过程简单可靠，反应条件温和，而且十分容易放大到大量制备。应用范围广，本发明提供的糖基固定相可作为亲水作用色谱分离材料，广泛用于寡糖、糖肽、糖蛋白、多肽、核苷等极性化合物的选择性分离。

主权项

一种液相色谱固定相的制备方法，包括如下步骤：a.硅胶预处理：硅胶加入质量浓度为1％～38％的盐酸或硝酸溶液中，加热至回流，搅拌1～48小时，过滤，水洗至中性，于80～160℃下干燥至恒重；b.硅胶表面引入巯基：将步骤a所得干燥硅胶置于玻璃或者聚四氟乙烯反应容器中，在惰性气体氛围下加入有机溶剂搅拌，滴加硅烷偶联剂，保持温度为60～140℃条件下搅拌2～48小时；反应体系冷却至室温，减压过滤并依次用甲醇、水、四氢呋喃、甲醇洗涤，固体产品在60～90℃条件下干燥6‑24小时即得巯丙基硅胶；c.巯基‑烯烃点击化学反应键合糖固定相：将步骤b所得的3‑巯基丙基硅胶中加入体积比为1/10～10/1的水/甲醇或水/乙醇混合溶剂中，每克3‑巯基丙基硅胶所需混合溶剂量为5‑50mL，再加入烯基糖和引发剂，在40～70℃条件下反应10～100小时；过滤，依次用甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于60～90℃条件下干燥6～48小时，即得键合糖固定相。