[发明专利]一种果状杜氏藻藻膏的制作和保存方法

摘要

本发明公开了一种果状杜氏藻藻膏的制作和保存方法，属水产养殖领域。过去，果状杜氏藻藻膏的制作大多通过离心机离心藻液或单一沉淀剂沉淀藻细胞来完成，耗电多，耗资巨大，沉淀效果差，沉淀时间长且沉淀不完全。为了克服传统技术的不足，本发明采用复合沉淀剂来沉淀浓缩藻液，沉淀完全且迅速，花钱少，耗时短，操作简便。在藻膏冷冻保存过程中，本发明采用复合冷冻保护剂且采用逐级降温的方法，工艺简单，易掌握，对细胞伤害小，细胞成活率高，营养成分基本不散失，保存时间长达5年，远高于传统保存方法的2-3年。

主权项

一种果状杜氏藻藻膏的制作方法，其特征在于具体方法如下：步骤(1)培养液的制备培养液成分：羊粪浸出液1份，磷酸钙0.1份，麦饭石粉0.01份，人尿0.5份，对氨安息香酸0.001份，泛酸钙0.03份，维生素B₁₂ 0.0003份，维生素B₁ 0.0001份，尿素0.2份，甜菜碱0.006份，脱落酸0.008份，CdCl₂ 0.02份，SrSO₄ 0.004份，Co(NO₃)₂·6H₂O 0.03份，Ca(NO₃)₂ 0.2份，NH₄NO₃ 0.1份，FeC₆H₅O₇·3H₂O 0.008份，TiCl₂ 0.0004份，NiSO₄ 0.05份，CoCl₂ 0.0005份，CuCl₂ 0.001份，煮沸冷却海水1000份；装入棕色磨口塞试剂瓶中，密封，放在摇床上摇匀15分钟，置入4℃冰箱保存，备用；步骤(2)接种培养培养分两个阶段，即二级培养；一级培养：取一3000毫升洁净三角烧瓶，加入步骤(1)所述培养液1500毫升，选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的果状杜氏藻藻种接种，接种密度2.5万个细胞/每毫升藻液，轻轻摇匀3分钟，高压灭菌锅消毒的报纸和橡皮筋封口，放入光照培养箱中培养，调节温度至25℃，光照强度6000lux，每天光照16小时，黑暗8小时；每天手动摇瓶6次，每次30秒钟，连续培养7天，可同时培养4瓶，转入下一级培养；二级培养：取两个带水龙头的塑料蒸馏水桶，每个25升(市场有售)，每个桶加入步骤1所述培养液15升，然后加入步骤一培养完的藻液1500毫升作藻种；每个桶的盖子上打上2个孔，孔直径10毫米，每个盖子上插入2根直径为8毫米的塑料管，1根充气，另1根排气，第一个桶的充气管一端连接空气压缩机，另一端插入到藻液底部，充入混合气体，气体成分＝空气98％+纯CO₂ 1.5％+纯氮气0.5％，每天只在光照时充气，黑暗无光照时停止充气，气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；第二个桶的充气管与第一个桶的排气管以料管相连，如此一来，充入的气体可以得到二次利用，提高了气体利用率；将这两个塑料桶放入微藻培养室中培养，室内空调控温，日光灯管照明，以打开灯管的数量多少来控制光照强度，连续培养9天，前6天调节温度至27℃，光照强度15000lux(因塑料桶壁的阻挡和吸收作用，到达藻液的实际光照强度约为8000lux)，光暗周期＝6h/L+6h/D，即提供间歇光，6小时连续光照，6小时连续黑暗，如此循环；后3天，调节温度至30℃，光照强度18000lux，每天提供15小时连续光照，然后9小时连续黑暗，如此循环，至第9天，藻细胞密度可达到140万/每毫升藻液，后转入下一步骤；步骤(3)藻膏制作取硫酸铜，明矾，生石灰，海藻酸钠适量，分别用粉碎机粉碎至面粉状(粒径大小以通过150目筛绢为宜)，按硫酸铜1份，明矾4份，生石灰2份，海藻酸钠0.5份的比例混合，用搅拌机充分搅拌、混合15分钟，直至均匀，制成复合沉淀剂，取步骤2所述培养后的藻液1000份，加入复合沉淀剂0.2份，用空气压缩机连接一塑料管插入藻液充气搅拌、混合15分钟，然后静置、沉淀48小时，弃上清液，取底部橘红色牙膏状藻膏，藻膏制作完毕。