[发明专利]一种果状杜氏藻藻膏的制作和保存方法

权利要求书

1.一种果状杜氏藻藻膏的制作方法，其特征在于具体方法如下：

步骤(1)培养液的制备培养液成分：羊粪浸出液1份，磷酸钙0.1份，麦饭石粉0.01份，人尿0.5份，对氨安息香酸0.001份，泛酸钙0.03份，维生素B₁₂ 0.0003份，维生素B₁ 0.0001份，尿素0.2份，甜菜碱0.006份，脱落酸0.008份，CdCl₂ 0.02份，SrSO₄ 0.004份，Co(NO₃)₂·6H₂O 0.03份，Ca(NO₃)₂ 0.2份，NH₄NO₃ 0.1份，FeC₆H₅O₇·3H₂O 0.008份，TiCl₂ 0.0004份，NiSO₄ 0.05份，CoCl₂ 0.0005份，CuCl₂ 0.001份，煮沸冷却海水1000份；装入棕色磨口塞试剂瓶中，密封，放在摇床上摇匀15分钟，置入4℃冰箱保存，备用；

步骤(2)接种培养

培养分两个阶段，即二级培养；一级培养：取一3000毫升洁净三角烧瓶，加入步骤(1)所述培养液1500毫升，选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的果状杜氏藻藻种接种，接种密度2.5万个细胞/每毫升藻液，轻轻摇匀3分钟，高压灭菌锅消毒的报纸和橡皮筋封口，放入光照培养箱中培养，调节温度至25℃，光照强度6000lux，每天光照16小时，黑暗8小时；每天手动摇瓶6次，每次30秒钟，连续培养7天，可同时培养4瓶，转入下一级培养；

二级培养：取两个带水龙头的塑料蒸馏水桶，每个25升(市场有售)，每个桶加入步骤1所述培养液15升，然后加入步骤一培养完的藻液1500毫升作藻种；每个桶的盖子上打上2个孔，孔直径10毫米，每个盖子上插入2根直径为8毫米的塑料管，1根充气，另1根排气，第一个桶的充气管一端连接空气压缩机，另一端插入到藻液底部，充入混合气体，气体成分＝空气98％+纯CO₂ 1.5％+纯氮气0.5％，每天只在光照时充气，黑暗无光照时停止充气，气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；第二个桶的充气管与第一个桶的排气管以料管相连，如此一来，充入的气体可以得到二次利用，提高了气体利用率；将这两个塑料桶放入微藻培养室中培养，室内空调控温，日光灯管照明，以打开灯管的数量多少来控制光照强度，连续培养9天，前6天调节温度至27℃，光照强度15000lux(因塑料桶壁的阻挡和吸收作用，到达藻液的实际光照强度约为8000lux)，光暗周期＝6h/L+6h/D，即提供间歇光，6小时连续光照，6小时连续黑暗，如此循环；后3天，调节温度至30℃，光照强度18000lux，每天提供15小时连续光照，然后9小时连续黑暗，如此循环，至第9天，藻细胞密度可达到140万/每毫升藻液，后转入下一步骤；

步骤(3)藻膏制作

取硫酸铜，明矾，生石灰，海藻酸钠适量，分别用粉碎机粉碎至面粉状(粒径大小以通过150目筛绢为宜)，按硫酸铜1份，明矾4份，生石灰2份，海藻酸钠0.5份的比例混合，用搅拌机充分搅拌、混合15分钟，直至均匀，制成复合沉淀剂，取步骤2所述培养后的藻液1000份，加入复合沉淀剂0.2份，用空气压缩机连接一塑料管插入藻液充气搅拌、混合15分钟，然后静置、沉淀48小时，弃上清液，取底部橘红色牙膏状藻膏，藻膏制作完毕。

2.一种根据权利要求1所述的果状杜氏藻藻膏的保存方法，其特征在于具体方法如下：

(1)复合冷冻保护剂的制备

取二甲基亚砜、甘油、碱性苯三酚、氯霉素各适量，按二甲基亚砜1份、甘油2份、碱性苯三酚0.5份、氯霉素0.02份的配比混合，充分混合、搅拌制成复合冷冻保护剂，放在黑色磨口塞试剂瓶中保存，备用；取权利要求1中步骤(3)所得藻膏1000份，加入200份琼脂，再加入复合冷冻保护剂0.05份，充分搅拌、混合，用食品级塑料袋分装，每袋1千克，封口机封口，外面再套一黑色塑料袋以避免光照，放入4℃冰柜中保存，24小时后再转入-5℃冰柜，24小时后转入-15℃冰柜，24小时后再转入-25℃冰柜长期保存，保存期可长达5年；需要时从冰柜中取出，室温下自然融化，即可投喂对虾、海参、海胆、梭子蟹、扇贝、牡蛎、贻贝、泥蚶、石斑鱼等的幼苗。