[发明专利]抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法，通过制备流感病毒复合免疫抗原、免疫产蛋母鸡，获得免疫鸡蛋、从免疫鸡蛋蛋黄液提取抗流感病毒鸡卵黄抗体粗品，并对粗品进行超滤纯化、除菌过滤、超低温喷雾干燥处理后，制得抗流感病毒鸡卵黄抗体。该产品成本低、产量高、具有高特异性，可实现产业化。本发明还提供了所述的抗流感病毒鸡卵黄抗体在各种消毒喷雾剂、湿巾、免洗洗手液、牙膏中的应用。

主权项

一种抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）流感病毒复合免疫抗原的制备：制备出甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒，确定其TCID50值，进行病毒灭活；根据病毒的TCID50值，将甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒分别与0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH=7.2）按比例进行稀释，再取等量的稀释好的甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒进行等比例混合均匀，并与弗氏完全佐剂按照1:1（V/V）充分乳化后制得流感病毒复合免疫抗原；（2）用制得的流感病毒复合免疫抗原对产蛋母鸡进行免疫，获得免疫鸡蛋：取健康适龄的产蛋母鸡，在鸡双翅轴骨头下的臂三角肌、背部等位置用乳化好的复合免疫抗原进行肌肉、皮下多点注射，以使蛋鸡产生更好的免疫反应；首次免疫采用弗氏完全佐剂，其余采用弗氏不完全佐剂；首次免疫前收集未免疫蛋作为阴性对照品，21天后免疫第二次，以后每隔21天免疫一次，每次免疫剂量为0.2~1ml/只，共免疫4~6次；用ELISA 跟踪检测免疫鸡蛋中抗流感病毒鸡卵黄抗体的效价，收集高效价免疫鸡蛋（1:1024），将每日收集的免疫鸡蛋编号，4℃下保存；（3）提取、纯化：将获得的免疫鸡蛋消毒、去除蛋清及蛋黄膜，留取蛋黄部分，通过水稀释法离心分离获得水溶性组分，并用聚乙二醇6000或者硅藻土提取获得抗流感病毒鸡卵黄抗体粗品；将粗品用纯化水溶解后，进行超滤纯化，截留相对分子量30KD~150KD滤液，将超滤截留液进行除菌过滤，再经过超低温喷雾干燥，制得抗流感病毒鸡卵黄抗体成品，4℃保存。