[发明专利]抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法及应用。

背景技术

流感是流行性感冒（Influenza）的简称，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，可通过感染者咳嗽和打喷嚏等方式导致传播，正常人也可能通过接触带有流感病毒的物体，再接触自己的口鼻而导致感染，具有发病率高、流行广泛、传播迅速等特点。世界卫生组织（WHO）的报告显示，全球人口的5%-15%会感染流感，全世界每年流感会导致300万-500万的严重病例，其中受伤害最大的是老年人、儿童和患有慢性疾病的患者，严重危害人类的身体健康及给社会造成巨大经济损失。

目前，预防流感最广泛的措施之一是注射疫苗。临床使用的流感疫苗有两种：一种为流感病毒灭活疫苗，最早于1945 年在美国上市，现在世界各国广泛使用；另一种为流感病毒减毒活疫苗，目前仅在美国、俄罗斯等少数国家使用。在中国，目前普遍推广使用的是流感病毒灭活疫苗。流感病毒灭活疫苗：流感病毒灭活疫苗主要是针对H1N1，H3N2 和B型流感病毒的三联灭活疫苗，这包括全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和亚单位疫苗。由于灭活疫苗具有较好的免疫效果和临床安全性，且生产成本低，在全世界范围普遍使用。然而，灭活疫苗存在许多缺点，这主要表现在：(1) 灭活疫苗为一种死病毒疫苗，皮下接种不同于病毒的自然感染过程，只能刺激机体产生相应的IgG 抗体，不能刺激呼吸道粘膜产生分泌型免疫球蛋白A(sIgA)，因此不能有效地阻止病毒在呼吸道内的繁殖；(2) 由于病毒变异，需要每年接种，皮下注射伴随的疼痛和潜在的感染风险不易被人们所接受；(3) 其保护作用未达到期望水平，尤其对低龄儿童保护效果较差；(4) 交叉保护作用很弱。由于流感疫苗对于流感的预防不具有广谱性和速效性，所以研发一种能够有效预防流感的新型产品就显得非常重要。

鸡卵黄抗体，是母鸡在卵的发育过程中血清中的IgY有效地转移到卵黄中而得。卵黄抗体具有安全方便、简单易得、产量高、不与IgG发生交叉血清学反应；不与类风湿因子或Fc受体相结合，在免疫检测过程中可避免产生假阴性或假阳性结果的优点，且耐热、耐酸，巴氏灭菌温度下不会失活且在pH值小于3时也能保持稳定活性，这些独特的优点使鸡卵黄抗体在临床和基础科学的应用中起着重要的作用，因此卵黄抗体在医学预防领域的应用越来越受到人类的关注，抗流感病毒鸡卵黄抗体的研制也将带来流感预防的新突破。

发明内容

本发明的目的提供一种安全、有效的主动性预防流感的抗流感病毒鸡卵黄抗体。

本发明的另一个目的是提供所述抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法。

本发明还有一个目的是利用抗流感病毒鸡卵黄抗体，可以制成各种预防流感的制剂，包括各种消毒喷雾剂、湿巾、免洗洗手液、牙膏等。

本发明采用如下技术方案：甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒，确定TCID50值，稀释后等比例混合、乳化制成流感病毒复合免疫抗原；用该抗原注射免疫产蛋母鸡，获得免疫鸡蛋；提取抗流感病毒鸡卵黄抗体粗品；对所述粗品进行超滤纯化，截留相对分子量30KD~150KD，将超滤截留液进行除菌过滤，滤液再经过超低温喷雾干燥，制得抗流感病毒鸡卵黄抗体成品，4℃保存。并进行纯度、活性检测。

具体实施方式

下面的实施例进一步说明本发明。

实施方式一：抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备。

（1）制备流感病毒复合免疫抗原。

制备出甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒，确定其TCID50值，进行病毒灭活；根据病毒的TCID50值，将甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒分别与0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH=7.2）按比例进行稀释，再取等量的稀释好的甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒进行等比例混合均匀，与弗氏完全佐剂按照1:1（V/V）充分乳化后制得流感病毒复合免疫抗原。

（2）用流感病毒复合免疫抗原免疫产蛋母鸡。