[发明专利]一种测定乳基婴幼儿配方粉中乳清蛋白含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定乳基婴幼儿配方粉中乳清蛋白含量的方法，所述方法包括以下的步骤：①待检样品上样液的制备；②酪蛋白标准品和乳清蛋白标准品上样液的制备；③聚丙烯酰胺凝胶电泳；④染色与脱色；⑤成像与计算。所述的方法准确性高、操作简单、成本低，以标准蛋白质的质量和trace值作参比，无需制作标准曲线即能实现准确检测乳清蛋白的含量。

主权项

一种测定乳基婴幼儿配方粉中乳清蛋白含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下的步骤：①待检样品上样液的制备：将待检样品搅拌并充分溶解于去离子水中，然后与SDS‑PAGE上样缓冲液混合均匀，水浴煮沸，迅速移入到冰水中冷却，即得所述待检样品上样液；所述待检样品指非水解的乳基婴幼儿配方粉；②酪蛋白标准品和乳清蛋白标准品上样液的制备：将α‑酪蛋白、β‑酪蛋白和κ‑酪蛋白溶解于水得酪蛋白标准品的混合样；将β‑乳球蛋白、α‑乳白蛋白和血清白蛋白溶解于水得乳清蛋白标准品的混合样；将所述酪蛋白标准品的混合样和所述乳清蛋白标准品的混合样分别和SDS‑PAGE上样缓冲液混合均匀，水浴煮沸，然后迅速移入到冰水中冷却，即得酪蛋白标准品上样液和乳清蛋白标准品上样液；③聚丙烯酰胺凝胶电泳：将步骤①所述待检样品上样液、步骤②所述酪蛋白标准品上样液和所述乳清蛋白标准品上样液上样，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，得聚丙烯酰胺凝胶；④染色与脱色：移出步骤③所述的聚丙烯酰胺凝胶，用染色液染色即得染色的凝胶；将所述染色的凝胶用脱色液脱色至背景透明，即得脱色的凝胶；⑤成像与计算：将步骤④所述脱色的凝胶置于凝胶成像系统内，用图像处理软件分析记录所述待检样品对应泳道各条带的trace值，对照所述酪蛋白标准品和所述乳清蛋白标准品对应泳道各条带的trace值，并根据步骤③所上样的酪蛋白标准品和乳清蛋白标准品的质量，计算所述待检样品中乳清蛋白占总蛋白的比例，所述的trace值为SDS‑PAGE的光密度扫描图谱内蛋白质对应峰的峰面积；所述计算的方法为：分别将待检样品上样液中α‑酪蛋白、β‑酪蛋白、κ‑酪蛋白、血清白蛋白、α‑乳白蛋白和β‑乳球蛋白的trace值除以在酪蛋白标准品上样液或乳清蛋白标准品上样液中各蛋白对应的trace值，再分别乘以在酪蛋白标准品上样液或乳清蛋白标准品上样液中各蛋白所对应的质量，分别计算出待检样品中6种蛋白的质量；所述计算的方法最后通过待检样品中3种乳清蛋白，即血清白蛋白、α‑乳白蛋白和β‑乳球蛋白的质量之和，与6种蛋白，即α‑酪蛋白、β‑酪蛋白、κ‑酪蛋白、血清白蛋白、α‑乳白蛋白和β‑乳球蛋白的质量之和的比值计算得出乳清蛋白占总蛋白的百分比。