[发明专利]一种测定乳基婴幼儿配方粉中乳清蛋白含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种测定乳基婴幼儿配方粉中乳清蛋白 含量的方法。

背景技术

牛乳中的蛋白质可大致分为酪蛋白和乳清蛋白两大类，其中酪蛋白占牛 乳中蛋白质含量的约80％，酪蛋白由αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和 κ-酪蛋白四种蛋白质组成，且四种酪蛋白占总酪蛋白的比例分别为40％、10％、 40％和10％，所述的百分比为质量百分比；乳清蛋白约占牛乳中蛋白质含量 的20％，乳清蛋白主要由β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、免疫球蛋白和血清白蛋 白组成，分别约占总乳清蛋白的50％、20％、12％和6％，所述的百分比为 质量百分比。乳清蛋白相比于酪蛋白能为婴儿提供更高的营养，另外婴儿的 消化系统也更易消化乳清蛋白而非酪蛋白。成熟母乳中乳清蛋白和酪蛋白的 比例为60:40，为了使婴儿配方粉更接近母乳，为婴儿提供更有利于其生长 的营养，我国市售的乳基婴儿配方粉都通过添加乳清蛋白来调整乳粉内乳清 蛋白的含量。

对于乳粉内乳清蛋白含量的检测，目前国内主要依据GB/T5413.21997， 该法检测时用光密度计来检测不同蛋白的光密度，最后通过计算不同蛋白的 光密度来计算乳清蛋白的含量。光密度检测法存在一定的缺陷，因为不同的 蛋白结合考马斯亮蓝的能力不同，即使在蛋白质浓度相同的情况下，不同蛋 白仍会表现出不同的光密度值，因此仅用蛋白质光密度扫描的trace值来计 算乳清蛋白的含量，会造成检测结果的准确度较低，误差较大。因此需要探 寻一种更加准确、操作简单、成本低、且能适用于乳基婴幼儿配方粉这一复 杂体系中乳清蛋白含量的检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中仅利用蛋白质光密度扫 描的trace值来检测乳粉中乳清蛋白含量时检测结果准确度较低、误差较大 的缺陷，提供一种准确性高、操作简单、成本低的测定乳基婴幼儿配方粉中 乳清蛋白含量的方法。

本发明提供一种测定乳基婴幼儿配方粉中乳清蛋白含量的方法，所述方 法包括以下的步骤：

①待检样品上样液的制备：将待检样品搅拌并充分溶解于去离子水中， 然后与SDS-PAGE上样缓冲液混合均匀，水浴煮沸，迅速移入到冰水中冷却， 即得所述待检样品上样液；所述待检样品指非水解的乳基婴幼儿配方粉；

②酪蛋白标准品和乳清蛋白标准品上样液的制备：将α-酪蛋白、β-酪蛋 白和κ-酪蛋白溶解于水得酪蛋白标准品的混合样；将β-乳球蛋白、α-乳白蛋 白和血清白蛋白溶解于水得乳清蛋白标准品的混合样；将所述酪蛋白标准品 的混合样和所述乳清蛋白标准品的混合样分别和SDS-PAGE上样缓冲液混 合均匀，水浴煮沸，然后迅速移入到冰水中冷却，即得酪蛋白标准品上样液 和乳清蛋白标准品上样液；

③聚丙烯酰胺凝胶电泳：将步骤①所述待检样品上样液、步骤②所述酪 蛋白标准品上样液和所述乳清蛋白标准品的上样液上样，进行聚丙烯酰胺凝 胶电泳，得聚丙烯酰胺凝胶；

④染色与脱色：移出步骤③所述的聚丙烯酰胺凝胶，用染色液染色即得 染色的凝胶；将所述染色的凝胶用脱色液脱色至背景透明，即得脱色的凝胶；

⑤成像与计算：将步骤④所述脱色的凝胶置于凝胶成像系统内，用图像 处理软件分析记录所述待检样品对应泳道各条带的trace值，对照所述酪蛋 白标准品和所述乳清蛋白标准品对应泳道各条带的trace值，并根据步骤③ 所上样的酪蛋白标准品或乳清蛋白标准品的质量，计算所述待检样品中乳清 蛋白占总蛋白的比例，所述的trace值为SDS-PAGE的光密度扫描图谱内蛋 白质对应峰的峰面积。