[发明专利]一种新型下调miRNA-21表达的方法在审
| 申请号： | 201410708026.1 | 申请日： | 2014-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN104404071A | 公开（公告）日： | 2015-03-11 |
| 发明（设计）人： | 徐林;陶弋婧;周涯;郭萌萌;赵娟娟 | 申请（专利权）人： | 遵义医学院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 563000 *** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新型下调miRNA-21表达的方法，在miRBase数据库中检索出>miR-21-5p的序列：5’-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3’；其反义互补序列为：5’-TCAACATCAGTCTGATAAGCTA-3’，再与载体粘性末端互补连接，得到合成的正反义链；将合成的正反义链混合，95℃加热5分钟退火形成双链，将退火的双链DNA室温连接30分钟得到连接产物；取2-10μl连接产物转化100μl感受态细胞DH5α，涂LB平板，含50μg/ml壮观霉素，37℃孵育16小时，取6个阳性克隆，接种到含50μg/ml壮观霉素的LB培养基中，按天根质粒小提试剂盒方法抽提质粒。本发明的有益效果是可以长效、便捷下调miR-21的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 新型 下调 mirna 21 表达 方法 | ||
【主权项】：
一种新型下调miRNA‑21表达的方法，其特征在于，按照以下步骤进行：步骤1：miR‑21‑ASO序列设计：在miRBase数据库中检索出>miR‑21‑5p的序列：5’‑UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA‑3’；其反义互补序列为：5’‑TCAACATCAGTCTGATAAGCTA‑3’，再与载体粘性末端互补连接，得到合成的正反义链；步骤2：pcDNA‑6.2‑miR‑21‑ASO载体构建：将合成的正反义链混合，95℃加热5分钟退火形成双链，将退火的双链DNA室温连接30分钟得到连接产物；步骤3：取2‑10μl连接产物转化100μl感受态细胞DH5α，涂LB平板，含50μg/ml壮观霉素，37℃孵育16小时，取6个阳性克隆，接种到含50μg/ml壮观霉素的LB培养基中，按天根质粒小提试剂盒方法抽提质粒，重组质粒即为pcDNA‑6.2‑miRNA‑21‑ASO。
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