[发明专利]A型流感病毒基因PCR扩增引物及其快速克隆方法

摘要

本发明涉及一种流感病毒基因克隆方法，具体涉及A型流感病毒基因PCR扩增引物及A型流感病毒基因快速克隆方法。本发明提供了A型流感病毒8个基因片段的PCR扩增引物和流感病毒反向遗传线性化载体的引物。本发明还提供了A型流感病毒基因快速克隆方法，用上述引物通过PCR反应即聚合酶链式反应扩增出流感病毒基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体，然后利用重组酶将上述线流感病毒各基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体在体外重组克隆，并转化到大肠杆菌进行克隆。本发明的大大简化了传统的流感病毒反向遗传技术中的基因克隆过程，解决传统的流感病毒反向遗传技术中流感病毒基因的克隆过程复杂、效率不高的问题。

主权项

A型流感病毒基因PCR扩增引物，其包括以下序列的引物：流感病毒的8个基因片段的引物：a,流感病毒基因片段PB2的引物：上游引物：5‘GGGAGCGAAAGCAGGTC’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGTCGTTT’3；b,流感病毒基因片段PB1的引物：上游引物：5‘ GGGAGCGAAAGCAGGCA’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGCATTT’3；c,流感病毒基因片段PA的引物：上游引物：5‘GGGAGCGAAAGCAGGTAC’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGTACTT’3；d,流感病毒基因片段HA的引物：上游引物：5‘GGGAGCAAAAGCAGGGG’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGGTGTTTT’3；e,流感病毒基因片段NP的引物：上游引物：5‘GGGAGCAAAAGCAGGGTA’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGGTATTTTT’3；f,流感病毒基因片段NA的引物：上游引物：5‘GGGAGCAAAAGCAGGAGT’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGAGTTTTTT’3；g,流感病毒基因片段MP的引物：上游引物：5‘GGGAGCAAAAGCAGGTAG’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGTAGTTTTT’3；h,流感病毒基因片段NS的引物：上游引物：5‘GGGAGCAAAAGCAGGGTG’3；下游引物：5‘TTAGTAGAAACAAGGGTGTTTT’3；流感病毒反向遗传线性化载体的引物：上游引物：5‘CCTTGTTTCTACTAATAACCCGGCGG’3；下游引物：5‘CCTGCTTTCGCTCCCCCCCAACTTCGG’3。