[发明专利]一种综合评价微藻产油能力的方法

摘要

本发明公开了一种综合评价微藻产油能力的方法，本发明通过评价微藻的生长速率、生物量产率、油脂产率、脂肪酸组成及生物柴油性质，得出最终的优势藻种。该方法包括下述步骤；(1)微藻细胞生长和收集；(2)提取细胞内总脂含量；(3)脂肪酸甲酯化；(4)GC-MS分析；(5)计算对数期油脂日产量；(6)黏度，密度，十六烷值，浊点，碘值及热值确定对微藻产油能力进行评价，本发明的方法能为比较不同培养体系下不同藻种产油能力提供标准，从而为最优的藻种选择和培养工艺优化提供依据。

主权项

一种综合评价微藻产油能力的方法，其特征是，包括如下步骤：1)微藻细胞生长和收集：检测藻液生物量，根据藻细胞密度的变化，确定藻类的生长曲线，通过时间和细胞密度的线性回归斜率，计算对数期的藻细胞的比生长速率；取一定量进入稳定期的藻液样品，离心后收集下层的细胞，用甲酸铵溶液清洗后低温干燥，即得待测干藻粉；2)提取细胞内总脂：称取一定量干藻粉于离心管中，加入氯仿/甲醇溶液，用超声破碎仪破碎，离心后提取有机相，向有机相中投加氯化钠溶液，静置分层，回收下层油脂提取溶液并测量其体积，计算油脂含量；3)脂肪酸甲酯化：称取与步骤2)等量的藻粉，加入甲醇/浓硫酸/氯仿的混合溶液，在90℃下水浴反应，待反应完毕分层后，取上层氯仿，即得供试品溶液；4)GC‑MS检测采用GC‑MS对脂肪酸甲酯进行定性处理，条件如下：色谱柱：DB‑23石英毛细管柱，其规格为60m×0.25mm×250nm；进样量：1μL；分流比：50:1；进样口温度：210℃；氦气流速：恒流，1ml/min；升温程序：:80℃保持5min，以4℃每分钟的速度升到290℃，并在290℃保持5min；离子源温度：250℃；数据被NIST质量光谱数据库分析；5)评价产油能力根据如下公式(3)，计算藻类对数期油脂的日产量：P＝DW×k×LW      (1)其中P是微藻对数期油脂日产量，DW是步骤1)中单位体积藻细胞对数末期的干重；k是步骤1)中的对数期比生长速率；LW是步骤2)中的基于干重下的油脂含量；6)黏度，密度，十六烷值，浊点，碘值及热值确定根据如下公式计算藻类脂肪酸甲酯混合物的平均不饱和度：ADU＝∑M╳Yi      (2)其中，ADU指的是藻油的平均不饱和度；Yi指的是每一个脂肪酸组分的质量分数；M是每一个脂肪酸组分中碳碳双键的数目；由生物柴油不饱和度计算得到生物柴油性质如黏度、密度、浊点、十六烷值、碘值和热值。