[发明专利]一种综合评价微藻产油能力的方法

权利要求书

1.一种综合评价微藻产油能力的方法，其特征是，包括如下步骤：

1)微藻细胞生长和收集：

检测藻液生物量，根据藻细胞密度的变化，确定藻类的生长曲线，通过时间和细胞密度的线性回归斜率，计算对数期的藻细胞的比生长速率；取一定量进入稳定期的藻液样品，离心后收集下层的细胞，用甲酸铵溶液清洗后低温干燥，即得待测干藻粉；

2)提取细胞内总脂：

称取一定量干藻粉于离心管中，加入氯仿/甲醇溶液，用超声破碎仪破碎，离心后提取有机相，向有机相中投加氯化钠溶液，静置分层，回收下层油脂提取溶液并测量其体积，计算油脂含量；

3)脂肪酸甲酯化：

称取与步骤2)等量的藻粉，加入甲醇/浓硫酸/氯仿的混合溶液，在90℃下水浴反应，待反应完毕分层后，取上层氯仿，即得供试品溶液；

4)GC-MS检测

采用GC-MS对脂肪酸甲酯进行定性处理，条件如下：

色谱柱：DB-23石英毛细管柱，其规格为60m×0.25mm×250nm；

进样量：1μL；

分流比：50:1；

进样口温度：210℃；

氦气流速：恒流，1ml/min；

升温程序：:80℃保持5min，以4℃每分钟的速度升到290℃，并在290℃保持5min；

离子源温度：250℃；

数据被NIST质量光谱数据库分析；

5)评价产油能力

根据如下公式(3)，计算藻类对数期油脂的日产量：

P＝DW×k×LW      (1)

其中P是微藻对数期油脂日产量，DW是步骤1)中单位体积藻细胞对数末期的干重；k是步骤1)中的对数期比生长速率；LW是步骤2)中的基于干重下的油脂含量；

6)黏度，密度，十六烷值，浊点，碘值及热值确定

根据如下公式计算藻类脂肪酸甲酯混合物的平均不饱和度：

ADU＝∑M╳Yi      (2)

其中，ADU指的是藻油的平均不饱和度；

Yi指的是每一个脂肪酸组分的质量分数；

M是每一个脂肪酸组分中碳碳双键的数目；

由生物柴油不饱和度计算得到生物柴油性质如黏度、密度、浊点、十六烷值、碘值和热值。

2.权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1)中所述的收集步骤为4℃下3000-5000转/分钟，离心6-10min，收集下层的细胞，用0.5M甲酸铵溶液清洗两遍脱盐，于60℃低温干燥细胞。

3.权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1)中所述的藻细胞比生长速率计算步骤为采用如下方程(3)：

k＝ln N-ln N₀/(t–t₀)      (3)

式中：k—微藻对数期比生长速率d^-1；

N—微藻在时间t时刻的细胞密度cells/ml；

N₀—微藻在对数期开始时刻t0的细胞密度cells/ml。

4.权利要求1所述的方法，其特征是，步骤2)中所述的提取细胞内总脂的步骤为称取0.09-0.1g干藻粉于50ml离心管中，加入10ml体积比为2:1氯仿/甲醇溶液超声破碎仪破碎6-10min，频率为21.5KHZ，超声功率为190W，于4000-5000r/min离心分离6-10min，重复两次提取有机相；向上述有机相中投加质量浓度为20％的氯化钠溶液，氯化钠溶液的用量为提取的有机相总体积的0.9％，充分摇匀1-2min，静置分层13-15min，回收下层油脂提取溶液并测量其体积，取5ml回收溶液于10ml玻璃试管中，用氮气吹干，将玻璃管放置于80℃烘箱中烘至衡重。