[发明专利]一种台湾肖楠幼嫩叶片快速繁殖无菌苗

摘要

一种台湾肖楠幼嫩叶片快速繁殖无菌苗，以台湾肖楠幼嫩叶片作为外植体，接种到过渡培养基中培养，挑取好的外植体转接到愈伤组织诱导培养基中培养，用愈伤组织再分化出丛生芽，将丛生芽在生根壮苗培养基中培养。对植物生长调节剂搭配比例、筛选出台湾肖楠无菌苗的植物生长调节剂和天然植物添加剂的搭配配方，进行台湾肖楠幼嫩叶片无性快繁。获得大量的无菌苗，保持优良的遗传性状，具有重要意义。比种子播种，常规无性繁殖，极大提高了台湾肖楠种苗的繁殖系数。有利于园林绿化、退耕还林、植树造林。

主权项

一种台湾肖楠幼嫩叶片快速繁殖无菌苗，其特征在于：按下列步骤:1）外植体培育：将台湾肖楠种植于有腐殖土中备用，待需要外植体材料时，用不锈钢剪刀剪取位于顶端新长出的叶片，作为外植体材料来源；2) 无菌苗获取：剪取的外植体材料，置于洗净的烧杯中，滴入1‑3滴普通洗洁精，1滴吐温20，盖上纱布并绑扎好，置于自来水下流水冲洗3‑5h；冲洗后的外植体材料于超净工作台上，先用75%酒精浸泡50s，用无菌水冲洗3次，而后将冲洗后的外植体用灭菌后的镊子放入0.1%的升汞中消毒8min，无菌水冲洗6次，每次1.5min，然后将外植体放入事先准备好的无菌培养皿内，用无菌滤纸吸干材料上残留的水分，接种前将叶片用无菌不锈钢刀片切成1.5cm的小段，然后将切好的外植体接种到过渡培养基中，待在过渡培养基中培养15~20d时，挑取无污染的外植体进行愈伤组织诱导；3）愈伤组织诱导：将过渡培养基中无污染的外植体转接到愈伤组织诱导培养基培养，接种时外植体横放，并轻压外植体材料使之与培养基充分接触；培养室温度25℃，湿度70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，7d后可见米白色疏松愈伤组织从切口处长出，待愈伤组织长到1.5cm左右宽时，转入丛生芽诱导培养基培养；4）丛生芽诱导与增殖：将疏松、嫩绿色、长势良好的愈伤组织转接于再分化培养基上，用镊子轻压愈伤组织使之与培养基充分接触，培养室温度25℃，湿度70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，培养30d后，可见丛生芽大量长出，继续培养35d，可得分化良好，长势旺盛的丛生苗；5) 壮苗培养：截取高4~5cm的丛生苗，接种于壮苗培养基上，WPM为基本培养基，培养室温度25℃，湿度70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，培养14d后得健壮的台湾肖楠无菌苗。