[发明专利]一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法。本发明的快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法，先利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，再使用玻璃珠破碎土壤微生物细胞后，利用RNA吸附柱对土壤微生物RNA进行吸附，从而节省了大量的提取时间，本发明方法所用时间短，步骤少，保持RNA的完整性，且更加地方便、快捷。

主权项

一种快速提取土壤微生物RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：土壤样品的前处理：取0.1‑1g的土壤于2ml的离心管中，加入50‑200μl Buffer A，300‑900μl无菌水，300‑600μl Buffer B，涡旋震荡30‑60s，加入50‑200μl Buffer C，100‑300μl Buffer D，涡旋震荡30‑60s，8000‑10000g离心1‑5min，去上清得沉淀A；所述Buffer A为pH为5‑6的0.5‑2M的Tris‑Cl缓冲液；所述Buffer B为0.1‑2M为包含0.1‑2M的Al³⁺离子的溶液；所述Buffer C为包含2‑6M的OH‑离子的溶液；所述Buffer D为pH＝7‑9的0.1‑0.5M的Tris‑Cl缓冲液；土壤微生物RNA的提取：所述沉淀A加入200‑400μl Buffer D，0.1‑1g的0.5‑1mm玻璃珠，200‑400μl Buffer E，200‑400μl Buffer F，涡旋震荡1‑3min，4℃温度条件下10000‑12000g离心2‑5min，取500‑800ul上清液至1.5ml离心管，加入500‑800μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30‑60s，4℃温度条件下14000‑16000g离心1‑5min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G混匀后得样品，将样品加到RNA吸附柱上，14000‑16000g离心1‑5min，去掉液体，加入500‑600ul去蛋白液，14000‑16000g离心1‑5min，去掉液体，加入500‑600ul漂洗液，14000‑16000g离心1min，去掉液体，再加入500‑600ul漂洗液，14000‑16000g离心1‑5min，去掉液体，吹干后加入30‑50ul洗脱液，14000‑16000g离心2‑5min，收集液体得RNA溶液；所述Buffer E为10‑20％的SDS溶液；所述Buffer F的配制方法为：取2‑3g LiCl，1‑2g Tris，3‑4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0‑9.0，定容至100ml；所述Buffer G为溶质重量百分数为50‑80％的乙醇溶液；所述去蛋白液为pH为6‑7的包含4‑6M盐酸胍，10‑30mM Tris‑HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为30‑50％；所述漂洗液为pH为7‑8的包含10‑30mM NaCL，1‑3mM Tris‑HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80‑90％；所述洗脱液为pH为6‑7的5‑15mM Tris‑HCI溶液。