[发明专利]一种检测JUMPY基因11号外显子突变的方法及探针

摘要

本发明提供了一种用于检测人类JUMPY基因11号外显子R336Q失活突变的方法，该方法将荧光定量PCR技术与TaqMan-MGB荧光探针技术相结合。本发明中还提供了用于检测的引物对、特异性探针以及阻断核酸。本发明中，采用荧光定量PCR方法，对失活突变区域序列进行特异性扩增检测，同时利用阻断核酸抑制样品中野生型DNA模板与引物探针的结合，实现突变的特异性扩增。本发明建立的检测方法简单有效，检测灵敏度高，操作简单快速，结果判读简单客观，是一种有效检测人类JUMPY基因11号外显子R336Q失活突变的方法。

主权项

一种用于检测人类JUMPY基因11号外显子R336Q失活突变的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、合成检测所需的引物对，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的基因序列如SEQ ID NO:1所示：5’‑CGGGCTGCTGGTACACTGTAT‑3’；所述下游引物的基因序列如SEQ ID NO:2所示：5’‑ATCCTAACACACCCAAAGAGCAG‑3’；合成特异性探针，其基因序列如SEQ ID NO:3所示：5‘FAM‑TGGGATCGGACCCC‑MGB‑NFQ‑3’；(2)、合成阻断核酸，其基因序列如SEQ ID NO:4所示：5‘VIC‑TGGGATCAGACCC C‑MGB‑NFQ‑3’；(3)、对待检测样品进行处理并提取DNA；(4)、配制荧光定量PCR反应体系A，对待测样品上样量进行监测，利用引物对和特异性探针扩增待测样品，得到样品DNA的检测Ct值，作为样品的质控Ct值；(5)、配制荧光定量PCR反应体系B，对待测样品进行PCR扩增检测，利用阻断核酸抑制待测样品中存在的野生型DNA即未发生JUMPY基因11号外显子突变的DNA，利用引物对和特异性探针扩增待测样品中可能存在的JUMPY基因11号外显子无义突变DNA，得到样品DNA的突变检测Ct值；(6)、以质控Ct值作为上样量是否适当的标准，质控Ct值＜30则上样量合适，检测结果有效；30≤质控Ct值≤34则上样量偏低，可适当提高上样量后检测；以突变检测Ct值与质控Ct的差值△Ct值作为JUMPY基因11号外显子是否发生无义突变的判断标准，△Ct值≤6则样品存在突变，△Ct值＞6则样品无该突变或低于突变检测下限。