[发明专利]一种利用栽培室制备冬虫夏草菌种材料的方法

摘要

本发明涉及一种利用栽培室制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法。该方法利用建立自动化或手动控制气候条件的高寒植物组培苗栽培室，模拟青藏高原的温度、湿度及光照等气候因子，应用组织培养快速繁殖栽培技术获得高寒植物组培苗，将制备的冬虫夏草菌源喷施接种到高寒植物组培苗上，通过营造适应环境促进冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与高寒植物组织共生，共生处理后获得的冬虫夏草菌种材料对钩蝠蛾幼虫的侵染率可达95.8～98.9％。

主权项

一种利用栽培室制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法，其特征是，该方法包括如下步骤：建立自动化或手动控制气候条件的高寒植物组培苗栽培室，模拟青藏高原的温度、湿度及光照的气候条件，通过离体组织培养快速繁殖栽培技术，获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物组培苗；将制备的冬虫夏草菌源喷施接种到栽培室高寒植物组培苗上，促进冬虫夏草菌中国被毛孢与高寒植物组培苗共生，形成菌物‑植物共生体，将菌丝检测结果为中国被毛孢的菌物‑植物共生体作为对寄主钩蝠蛾昆虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料；所述的将制备的冬虫夏草菌源喷施接种到栽培室高寒植物组培苗的方法是：将制备的冬虫夏草菌源喷淋接种到栽培室栽培的高寒植物组培苗上，每瓶喷施1～2ml菌悬液，或每平方米洁净土壤培育区喷施50～100mL菌悬液，在1天内喷施1～2次，喷施后利用5～100lx的低强度散射光进行光照，控制栽培室内温度在13±5℃，空气湿度保持在70～90％，共生培育3～15天；所述的离体组织培养快速繁殖栽培技术是：在冬虫夏草主产区海拔2500～5200米的高寒草甸采集高寒植物苗或其种子，应用常规植物离体组织培养快速繁殖技术，快速繁殖和栽培高寒植物组培苗，控制栽培室的波动温度保持在夜2℃～昼22℃，空气湿度保持在65～95％，离体快繁高寒植物组培苗接受的光照强度为500～2000lx，光照时间每天10～16小时，使组培苗旺盛生长获得高寒植物苗；所述的冬虫夏草菌源的制备方法是：从冬虫夏草主产区的冬虫夏草适生地采集新鲜冬虫夏草或其子囊孢子，采用合适嗜低温菌物的工业微生物方法进行分离纯化，经分子生物学方法或形态学方法鉴定为中国被毛孢(Hirsutella sinensis)，通过常规低温发酵法在13±5℃条件下发酵为冬虫夏草菌中国被毛孢菌丝体及分生孢子或芽生孢子，并进一步将菌丝体及分生孢子或芽生孢子按发酵物与水体积比1∶10～1∶200稀释成的悬浮液，作为冬虫夏草菌源；或者是直接采用洁净的冬虫夏草新鲜子囊孢子稀释制成每毫升含有100～1000个子囊孢子的悬浮液，作为冬虫夏草菌源。