[发明专利]一种利用栽培室制备冬虫夏草菌种材料的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用栽培室制备冬虫夏草菌种材料的方法。

背景技术

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis(Berk.)Sung，Sung，Hywel-Jones&Spatafora是一种虫生子囊真菌，寄生于鳞翅目Lepidoptera蝠蛾科Hepialidae钩蝠蛾属Thitarodes昆虫的幼虫，其无性型为中国被毛孢Hirsutella sinensis Liu，Guo，Yu&Zeng。冬虫夏草寄主钩蝠蛾属Thitarodes昆虫的一个世代包括卵、幼虫、蛹和成虫四个发育阶段，幼虫营地下隧道式穴居生活，杂食性，喜食圆穗蓼、头花蓼、小大黄和珠芽蓼等高寒植物的幼嫩根茎。

冬虫夏草分布于青藏高原高海拔区域，其生长范围局限，产量也极为有限。它是青藏高原特色名贵滋补中药材，具有重要的药用和经济价值。由于冬虫夏草的形成过程中仍有许多关键问题尚不清楚，冬虫夏草菌侵染钩蝠蛾昆虫的侵染活性较弱，原生态冬虫夏草道地药材的产业化迄今仍存在许多障碍难题。冬虫夏草寄主昆虫的饲料高寒植物生长在青藏高原，其具有生长速度慢，繁殖系数不高等特点，在栽培室内利用离体组织培养快速繁殖技术可以解决高寒植物苗的来源问题，该技术是生产上应用最广泛、产生较大经济效益的一项技术，其特点是繁殖速度快、系数大，周年生产、生长整齐，利用这项技术可以使一个单株一年繁殖几万到几百万个植株。

目前采用常规冬虫夏草菌侵染寄主钩蝠蛾昆虫幼虫仍存在侵染率低、耗费时间长等问题。中国发明专利申请(公开号：CN102696555A)公开了一种半野生人工培殖冬虫夏草的方法，中国发明专利申请(公开号：CN102405763A)公开了一种冬虫夏草的培育方法，上述2个专利申请均采用含有中国被毛孢的菌液连续喷洒寄主幼虫体表的方法进行接种侵染；中国发明专利申请(公开号：CN102696392A)公开了天然冬虫夏草的增产方法，其中采用诱集液诱集蝙蝠蛾幼虫后，向幼虫喷洒蝙蝠蛾被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉两种菌种液体种；中国发明专利申请(公开号：CN102106235A)公开了一种全人工培养冬虫夏草的方法，其中采用一端直径小于0.2mm的不锈钢实心针或空心针的针状器具，沾取中国被毛孢菌体和孢子混悬液刺伤寄主幼虫的方法进行接种侵染；中国发明专利申请(公开号：CN102792855A)公开了一种用于冬虫夏草寄主感染的菌种材料及寄主感染方法，采用冬虫夏草菌皮作为菌种材料灌注、或拌入饲料喂食、或注射、或喷淋侵染寄主幼虫。但上述方法存在侵染活性低、或损伤后存活率低、或耗费时间过长、或菌种材料产量有限等问题，是制约原生态冬虫夏草道地药材产业化的关键问题之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用栽培室制备冬虫夏草菌种材料的方法。该方法利用自动化或手动控制气候条件的高寒植物组培苗栽培室，通过构建冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与活体高寒植物组培苗组织的共生体，激活中国被毛孢的侵染活性，得到对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料，达到高效侵染寄主钩蝠蛾幼虫的目的。

发明人研究发现冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢在自然界中与其适生地中的多种高寒植物的根、茎、叶等组织存在共生现象。进一步的研究发现，经高寒植物组织根、茎、叶等组织共生，共生后要比未共生的中国被毛孢的侵染活性高数十至数百倍，基于这一原理发明本方法。

本发明制备具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料的方法包括：建立自动化或手动控制气候条件的高寒植物组培苗栽培室，模拟青藏高原的温度、湿度及光照等气候条件，通过离体组织培养快速繁殖栽培技术，获得冬虫夏草寄主钩蝠蛾幼虫取食的高寒植物组培苗；将制备的冬虫夏草菌源喷施接种到栽培室高寒植物组培苗上，促进冬虫夏草菌的无性阶段中国被毛孢与高寒植物组培苗共生，形成菌物-植物共生体，将菌丝检测结果为中国被毛孢的菌物-植物共生体作为对寄主钩蝠蛾幼虫具有高侵染活性的冬虫夏草菌种材料。

本发明的具体步骤包括：