[发明专利]一种猪精液的冷冻和解冻方法

摘要

本发明公开了一种猪精液的冷冻和解冻方法，包含以下步骤：①采集优秀的种公猪精液，经精液检测后，按比例的稀释，然后平衡0.5-1h；②将精液移入15℃条件下降温平衡3h；③在15℃条件下离心(800g，10min)，加入无甘油的I液，缓慢降到5℃，平衡2h，再加入含甘油的II液，然后分装；④进行冷冻程序后投入液氮保存；⑤与冷冻时原理相反进行解冻；⑥对解冻后的精液品质进行检测。本发明可以使精液得到长期保存，有效提高了公猪的利用率，降低活体保种的成本，防止优良基因的漂变和传染病的发生，利于深入开展猪的联合育种工作，获得更大的遗传进展，在保护地方优良品种与加快品种改良等方面具有重要的研究价值和广泛的应用前景。

主权项

一种猪精液的冷冻和解冻方法，包含以下步骤：(一)、猪精液的冷冻过程：①首先采集优秀的种公猪精液，用精子密度仪测出其内部精子密度，然后在37‑40℃的温度下用稀释剂稀释该精液，使其最终活精子数与整体公猪精液的比例为0.51∶1，稀释后将该精液在17‑20℃的室温环境下平衡0.5‑1h。②将上述①中的精液移入15℃的环境下降温，平衡3h。③取上述②中的精液800g，使其在15℃的环境下离心10min，先加入无甘油的稀释液I，然后温度缓慢降至5℃，平衡2h后，再加入含甘油的稀释液II，然后用细管进行分装。④取上述③中分装好的精液开始进行冷冻过程：精液所处环境，初始温度为5℃，以3℃/min的速率从5℃降到‑5℃，再于‑5℃条件下保持1min结晶，然后以50℃/min的速率从‑5℃降到‑140℃，最后将精液放入广口液氮罐内与液氮面距离5cm处，熏蒸20min，再投入液氮保存。(二)、猪精液的解冻过程：迅速取出于液氮中保存的冷冻的猪精液，与冷冻原理相反，温度以50℃/min的速率从‑140℃升至‑5℃，再以3℃/min的速率从‑5℃升至5℃，解冻即可。(三)、猪精液的检测：取解冻后的猪精液，通过电子生物显微镜和计数板对其精子活力、畸形率、有效精子数进行检测。