[发明专利]中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法

摘要

本发明涉及中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法，属于植物提取物、天然药物与化妆品的开发和应用领域。以漆树木粉为原料、经过提取、萃取、中低压色谱和高效液相制备得到95%以上的漆黄素。本发明从漆树中得到具有高效抑制酪氨酸酶活性的成分，在150µg/mL浓度以上时，对酪氨酸酶活性的抑制率达＞95%以上。该制备过程快速简单，是开发潜在的天然酪氨酸酶抑制剂的良好来源。

主权项

中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：第一步，脱脂：漆树木粉干燥，粉碎，采用木粉与石油醚或正己烷按质量体积比1:15‑35 g/mL进行脱脂，温度30‑80℃，时间1‑3 h，提取次数1‑4次，过滤后得到滤渣，干燥，得到脱脂漆树木粉；第二步，提取：将脱脂漆树木粉与30%～100%甲醇水溶液或乙醇水溶液按质量体积比1:15‑30 g/mL提取1‑4次，提取温度60‑80℃，提取时间1‑3 h，提取后，过滤，合并滤液，真空浓缩得到漆树粗提取物；第三步，萃取：将漆树粗提取物与乙酸乙酯按质量体积比1:15‑30 g/mL萃取2‑5次，合并乙酸乙酯萃取相，真空浓缩，得到乙酸乙酯萃取物；第四步，中压柱纯化：将乙酸乙酯萃取物与中压柱填料按质量比1:15‑50吸附，中压柱柱长20‑300 cm，柱直径2‑30 cm，采用不同比例的洗脱剂进行洗脱，柱压为3‑20 MPa, 检测波长280‑360 nm，流速2‑200 mL/min，富集漆黄素部位，真空浓缩，回收溶剂，浓缩物为漆黄素提取物，经HPLC分析，漆黄素含量70%以上；第五步，HPLC制备分离：将70%以上漆黄素提取物进行高效液相制备，得到漆黄素，经HPLC分析，漆黄素含量在95%以上；第六步，漆黄素抑制酪氨酸酶活性评价：HPLC制备得到的漆黄素进行抑制酪氨酸酶活性评价，通过紫外色谱检测多巴色素的生成量，确定当漆黄素甲醇溶液浓度范围在100~200μg/mL，抑制率为60~100%，其IC₅₀值为69.46 μg/mL。