[发明专利]中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法

权利要求书

1.中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

第一步，脱脂：

漆树木粉干燥，粉碎，采用木粉与石油醚或正己烷按质量体积比1:15-35 g/mL进行脱脂，温度30-80℃，时间1-3 h，提取次数1-4次，过滤后得到滤渣，干燥，得到脱脂漆树木粉；

第二步，提取：

将脱脂漆树木粉与30%～100%甲醇水溶液或乙醇水溶液按质量体积比1:15-30 g/mL提取1-4次，提取温度60-80℃，提取时间1-3 h，提取后，过滤，合并滤液，真空浓缩得到漆树粗提取物；

第三步，萃取：

将漆树粗提取物与乙酸乙酯按质量体积比1:15-30 g/mL萃取2-5次，合并乙酸乙酯萃取相，真空浓缩，得到乙酸乙酯萃取物；

第四步，中压柱纯化：

将乙酸乙酯萃取物与中压柱填料按质量比1:15-50吸附，中压柱柱长20-300 cm，柱直径2-30 cm，采用不同比例的洗脱剂进行洗脱，柱压为3-20 MPa, 检测波长280-360 nm，流速2-200 mL/min，富集漆黄素部位，真空浓缩，回收溶剂，浓缩物为漆黄素提取物，经HPLC分析，漆黄素含量70%以上；

第五步，HPLC制备分离：

将70%以上漆黄素提取物进行高效液相制备，得到漆黄素，经HPLC分析，漆黄素含量在95%以上；

第六步，漆黄素抑制酪氨酸酶活性评价：

HPLC制备得到的漆黄素进行抑制酪氨酸酶活性评价，通过紫外色谱检测多巴色素的生成量，确定当漆黄素甲醇溶液浓度范围在100~200μg/mL，抑制率为60~100%，其IC₅₀值为69.46 μg/mL。

2.根据权利要求1所述的中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法，其特征在于中压柱填料可选择200-500目的硅胶和氧化铝中的一种或二种任意比，洗脱剂为石油醚、乙醚、正己烷、乙酸乙酯、氯仿和甲醇中的一种或几种的混合溶液。

3.根据权利要求1所述的中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法，其特征在于中压柱填料也可选择孔径为60 A，40-60 μm的ODS C18、C8和Sephedex LH-20材料，洗脱剂为甲醇、乙醇和水中的一种或几种的混合溶液。

4.根据权利要求1所述的中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法，其特征在于高效液相制备的条件为：色谱柱XB-C18 Φ10 mm×250 mm,5 μm；流动相：甲醇:水=5:5(V/V)，紫外360 nm，流速：5mL/min。

5.根据权利要求1所述的中压柱快速分离有抑制酪氨酸酶活性的漆黄素的制备方法，其特征在于HPLC分析条件为：RP-18 endcapped 柱(4.6×250mm,5μm),流动相为体积比为35:65的甲醇-0.5%醋酸水溶液，紫外检测器，检测波长为280和360nm, 流速为1mL/min。