[发明专利]牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌基因诊断试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供一种牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌（Pasteurellamultocida）的基因诊断试剂盒及检测方法，属于生物科学技术领域。该试剂盒及检测方法是以多杀性巴氏杆菌基因保守区序列设计的一对引物为主体而设计的。本发明采用聚合酶链式反应（PCR）技术，对牛的病原菌－多杀性巴氏杆菌的特异性DNA片断进行定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高；可用于牛巴氏杆菌病的临床检测，也用于牛各时期养殖过程中的细菌跟踪检测，还可以用于牛养殖环境监测，避免病菌传播流行，具有很高的实用价值。

主权项

牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的基因诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒包括A液、B液、C液、盒子和泡沫板；所述的A液为样品稀释液，内装无菌生理盐水，5管，每管5mL；所述的B液为PCR反应液，1管，内装192µl PCR扩增反应液，包括168µl ddH₂O、14.4µl 含Mg²⁺ 的10×Buffer [Tris‑HCl 100mmol/L 、pH为9.0, KCl 500mmol/L, MgCl₂ 15mmol/L, Triton‑X100 1%]、3.2µl 浓度为250μmol/L的dNTP、2.4µl浓度为0.5μmol/L引物PmF、2.4µl浓度为0.5μmol/L引物PmR和1.6µl酶活单位为8U 的TaqE；PmF为：5'‑ACGCTTTGCCTT GCAAGATAC‑3',PmR为：5'‑GATTCACGTAACAAACCAGGC‑3'；所述的C液为阳性对照液，1管，内装50µl 多杀性巴氏杆菌阳性模板；  所述泡沫板装于盒子中，其大小与盒子的底面相同；泡沫板上有不少于上述小管数量的小孔，上述各小管分别对应放置于这些小孔中。