[发明专利]一种用于被动皮肤过敏反应试验的综合评判方法

摘要

本发明公开了一种判断被动皮肤过敏反应试验的综合评价方法，具体方法包括：被动皮肤过敏反应注射抗原后(1)肉眼观察注射抗原后的大鼠一般症状表现；(2)计算大鼠在注射抗原后的足趾肿胀度；(3)取血观察大鼠血液及生化指标；(4)处死大鼠，观察大鼠背部皮肤是否出现蓝斑，并检测大鼠皮肤、足趾、双耳以及血液的OD值。

主权项

一种用于被动皮肤过敏反应试验的综合评判方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)被动皮肤过敏反应试验抗血清的制备：雄性BN大鼠随机分为生理盐水组、受试药物组；各组分别于第1、3、5日致敏，共三次，每组动物每次皮下给予相对应药物的临床常用剂量；每组均于末次致敏后第12天进行激发，并分别在激发前取血，3000r/min离心15min后取上清液，‑20℃冷冻保存，备用；(2)被动皮肤过敏试验：SD大鼠随机分为生理盐水组、受试药物组，每组8只；大鼠背部中线两侧距背脊约1.5cm处剃毛，面积约4×4cm，用豚鼠主动全身过敏试验制备的各组抗血清原液及用生理盐水1:1倍稀释液，分别皮内给于各组大鼠去毛各点，每个点0.1mL；每只动物皮内注射抗血清24h后，足趾仪量取各组大鼠的右后肢足趾容积，各组动物尾静脉注射相对应抗原，含0.5％的伊文斯蓝，每只1.0mL；30min后，(a)肉眼观察给予对应抗原后大鼠的一般症状；(b)足趾仪再次量取各动物的右后肢足趾容积，按如下公式计算动物的右后肢足趾的肿胀度：动物的右后肢足趾的肿胀度＝(注射后足趾容积‑注射前足趾容积)/注射前足趾容积×100％；(c)动物眼眶取血，注射不含0.5％的伊文思蓝的抗原，抗凝血液检测血液常规指标，包括白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积、平均红细胞压积、平均红细胞体积、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度和血小板计数，3000r/min离心15min后取上清液，用于检测血液生化指标，用日本Hitachi7020全自动生化分析仪测定心肌酶四项：谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、α‑羟丁酸脱氢酶、肌酸激酶；肾功能四项：血糖、尿素、肌酐、尿酸；肝功能七项：谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、球蛋白、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶；(d)处死动物，翻转动物背部皮肤，并观察皮肤内侧有无>5mm蓝斑并量取蓝斑直径；(e)剪取动物的右侧后足，背部皮肤，双耳，剪碎后分别加入丙酮和生理盐水按体积比7:3的混合液5～6ml，侵泡24h后离心，取上清液，630nm处检测OD值。