[发明专利]一种基于荧光定量PCR技术检测β-酪蛋白基因型的方法

摘要

本发明公开了一种荧光定量PCR技术检测β-酪蛋白基因型的方法，根据β-酪蛋白的碱基序列，设计出分别与A1型β-酪蛋白基因和A2型β-酪蛋白基因相匹配的两组引物，然后将待测样品分别与A1型引物组和A2型引物组进行PCR扩增，扩增过程中不同引物扩增得到的PCR产物会产生不同的荧光信号，随着PCR反应的进行，PCR产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加，每经过一个PCR反应循环收集一次荧光信号，通过荧光信号的强度变化监测PCR产物量的变化，从而分别得到一条荧光信号强度曲线图，根据两个荧光信号的增强先后次序即可判断出奶牛β-酪蛋白基因型。本发明提供的方法能检测出不同的β-酪蛋白基因型，从而保证人们喝的牛奶为含有A2型β-酪蛋白的健康牛奶。

主权项

一种基于荧光定量PCR技术检测β‑酪蛋白基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：根据β‑酪蛋白的碱基序列，设计两组不同的引物，其中一组引物的上游引物3’端和A1型的基因位点匹配，记为A1型引物；另一组引物的上游引物3’端和A2型的基因位点匹配，记为A2型引物，两组引物的下游引物相同；其中，所述的A1型引物的上游引物为：5’CCT TCC CTG GGC CCA TTC A3’；所述A2型引物的上游引物为5’CCT TCC CTG GGC CCA TTC C3’；A1型引物和A2型引物的下游引物均为5’GAT ATT TAG GGA AGG GCA TTT3’；将待检测的奶牛基因组DNA分别与A1型引物、A2型引物在两个反应体系中同时进行PCR扩增，扩增后每个样品与每组引物产生一个荧光信号；监控荧光信号强度；根据两个荧光信号的增强先后次序即可得出奶牛β‑酪蛋白基因型：当A1型引物的荧光信号首先增强时，即可得出样品DNA为A1型；当A2型引物的荧光信号首先增强时，即可得出样品DNA为A2型；当A1型和A2型引物的荧光信号同时增强时，即可得出样品DNA为杂合型。