[发明专利]一种基于荧光定量PCR技术检测β-酪蛋白基因型的方法

权利要求书

1.一种基于荧光定量PCR技术检测β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

根据β-酪蛋白的碱基序列，设计两组不同的引物，其中一组引物的上游引物3’端和A1型的基因位点匹配，记为A1型引物；另一组引物的上游引物3’端和A2型的基因位点匹配，记为A2型引物，两组引物的下游引物相同；

其中，所述的A1型引物的上游引物为：5’CCTTCCCTGGGCCCATTCA3’；

所述A2型引物的上游引物为5’CCTTCCCTGGGCCCATTCC3’；

A1型引物和A2型引物的下游引物均为5’GATATTTAGGGAAGGGCATTT3’；

将待检测的奶牛基因组DNA分别与A1型引物、A2型引物在两个反应体系中同时进行PCR扩增，扩增后每个样品与每组引物产生一个荧光信号；

监控荧光信号强度；

根据两个荧光信号的增强先后次序即可得出奶牛β-酪蛋白基因型：当A1型引物的荧光信号首先增强时，即可得出样品DNA为A1型；当A2型引物的荧光信号首先增强时，即可得出样品DNA为A2型；当A1型和A2型引物的荧光信号同时增强时，即可得出样品DNA为杂合型。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增具体包括如下操作：

取DNA模板0.5～1.5μl，加入SYBRFASTqPCRMasterMix5～15μl、10pM的上、下游引物各0.5～1.5μl，加双蒸水至15～35μl得PCR扩增体系；将所述扩增体系加热至92～95℃预变性1～5min，然后在90～95℃变性5～15s，60～65℃退火5～15s，70～75℃延伸30～50s，自变性开始至延伸结束记为一次循环，进行30～50次循环的操作。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增具体包括如下操作：所述DNA模板的加量为1μl，所述SYBRFASTqPCRMasterMix的加量为7μl，所述上、下游引物的浓度均为10pM，上、下游模板的加量均为1μl，所述预变性的温度为95℃，时间为2min，变性的温度为94℃，时间为10s，退火的温度为61℃，时间为10s，延伸的温度为72℃，时间为40s，循环的次数为40次。

4.根据权利要求1至3之一所述的检测方法，其特征在于，所述监控荧光信号强度具体为：每经过一个PCR反应循环收集一次荧光信号，通过荧光信号的强度变化监测产物量的变化并得到一条荧光信号强度曲线图。