[发明专利]一种基于酶切法检测β-酪蛋白基因型的方法在审
| 申请号： | 201410273637.8 | 申请日： | 2014-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN105219839A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 孙子奎;高文学;丁方美;王锋;方钰 | 申请（专利权）人： | 上海派森诺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/44 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200232 上海市徐汇*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于酶切法检测β-酪蛋白基因型的方法，其包括以下步骤：根据β-酪蛋白基因的碱基序列，设计出能够使A1型β-酪蛋白基因的扩增片段内含有TaqI酶切位点而不能使A2β-酪蛋白基因的扩增片段产生TaqI酶切位点的引物，利用该引物对待检测的奶牛基因组DNA进行PCR扩增，利用限制性内切酶TaqI对扩增产物进行酶切，根据琼脂糖凝胶电泳的结果进行判断，含有A1β-酪蛋白的扩增产物在酶切之后就会产生一个218bp的片段和一个35bp的小片段；A2β-酪蛋白基因的扩增产物不会产生TaqI酶切位点，则无法被TaqI切开，仍为253bp的条带。本发明提供的基于酶切法检测β-酪蛋白基因型的方法能检测出β-酪蛋白不同的基因型，从而保证人们喝的牛奶为含有A2型β-酪蛋白的牛奶。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 酶切法 检测 蛋白 基因型 方法 | ||
【主权项】：
一种基于酶切法检测β‑酪蛋白基因型的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：根据β‑酪蛋白基因的碱基序列，在β‑酪蛋白基因第67位氨基酸编码序列附近设计可以扩增产生TaqI酶切位点的引物，所述引物的序列为：上游引物：5’CCA GAC ACA GTC TCT AGT CTA TCC CTT CCC TGG GCC CAT CG3’；下游引物：5’CAT CAG TGA GAG TCA GGC TCT GCC T3’；利用引物对待检测的奶牛基因组DNA进行PCR扩增，扩增出的A1型β‑酪蛋白基因片段内部会产生一个TaqI酶切位点；扩增出的A2型β‑酪蛋白基因片段内部不会产生TaqI酶切位点，则无法被TaqI切开，仍为253bp的条带。利用限制性内切酶TaqI对扩增产物进行酶切，根据琼脂糖凝胶电泳的结果进行判断，含有A1型β‑酪蛋白基因的扩增产物在酶切之后就会产生一个218bp的片段和一个35bp的小片段；含有A2型β‑酪蛋白基因的扩增产物则无法被TaqI切开，仍为253bp的条带。
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