[发明专利]一种利用厌氧条件下发酵生产丁二酸的方法

摘要

本发明涉及了一种利用玉米粉全水解液作为发酵培养基厌氧发酵生产丁二酸的方法。本发明采用玉米粉双酶解法生产的葡萄糖水解液为唯一碳源，玉米粉生产葡萄糖所产生的滤渣——玉米渣经中性蛋白酶酶解所得到的玉米糖渣水解液作为唯一氮源，将这两种水解液组合形成玉米粉全水解液作为发酵培养基，在不添加其他营养物质条件下，利用其厌氧发酵生产丁二酸。本发明发酵生产丁二酸的方法，可以代替价格昂贵的酵母粉和蛋白胨，同等条件下，与LB培养基发酵生产丁二酸相比，丁二酸的产量提高了1.37%，转化率提高了21.65%。本方法更经济，更清洁，该方法对于丁二酸产业化有着重大的意义及经济价值。

主权项

一种厌氧发酵生产丁二酸的方法，其特征在于所述方法的发酵培养基为玉米粉全水解液；所述的玉米粉全水解液包括玉米粉水解所得的葡萄糖水解液和玉米渣水解液；所述的葡萄糖水解液为玉米粉经液化酶和糖化酶双酶解法水解所得；所述的玉米粉双酶解法的具体步骤为：将玉米粉与纯水以固体质量分数38 %的比例混合均匀，并加入钙离子，其添加量按照每克原料添加0.000175g钙离子，在pH=6.5，95℃条件下添加7 U/克原料的液化酶，并保温至液化结束；将液化液灭完酶活后在pH=4.5，60℃条件下添加200 U/克原料的糖化酶，并保温48 h，所得糖化液经过滤得到的滤液为玉米葡萄糖水解液；所述的玉米渣水解液由上述玉米粉双酶法水解过滤后的玉米渣经中性蛋白酶水解所得; 所述的玉米渣水解的具体步骤为：将糖化液过滤后的滤渣和纯水按固体质量百分数10%的比例混合，在pH=7.0，55℃条件下添加中性蛋白酶，其添加量为滤渣质量的0.3%，24 h后过滤所得滤液为玉米渣水解液，并用凯式定氮法对水解液中总氮含量进行测定；所述的发酵菌株菌为重组大肠杆菌AFP111（ Escherichia coli AFP111）。