[发明专利]将黄色颖壳的水稻品种的颖壳颜色改为褐色的育种方法

摘要

本发明提供了一种将黄色颖壳的水稻品种的颖壳颜色改为褐色的育种方法，包含以下步骤：在颖壳颜色决定基因OsCAD2外显子区选取靶标片段并构建植物CRISPR/Cas9打靶重组载体，导入水稻细胞并再生成苗，在通过对再生株系基因组目标片段的测序，获取携带两个等位OsCAD2基因同时发生功能缺失突变的株系，经过表型鉴定，实现颖壳颜色的改变。实验表明，本方法可快速改变水稻品种的颖壳颜色。

主权项

一种将黄色颖壳的水稻品种的颖壳颜色改为褐色的育种方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1、在水稻颖壳颜色决定基因OsCAD2外显子区中选取以碱基NGG结尾的DNA片段作为靶标片段，其中，N代表碱基A、G、C、T中的任意一种，所述靶标片段位于所述OsCAD2基因外显子上；步骤2、利用所述靶标片段，构建用于水稻OsCAD2基因打靶的CRISPR/Cas9重组载体，其中所述重组载体中包含具有所述靶标片段的向导RNA表达框和Cas9核酸酶表达框；步骤3、将所述重组载体导入水稻细胞，诱导含有所述靶标片段的向导RNA表达框和Cas9核酸酶表达框在水稻细胞中共同表达，剪切OsCAD2基因的双链靶标片段，再通过水稻细胞自身的DNA修复功能，在靶标位点随机插入或缺失碱基，实现水稻细胞内OsCAD2基因的功能缺失突变；步骤4、用导入所述重组载体的水稻细胞再生若干水稻植株；步骤5、对再生的水稻植株中OsCAD2基因包含所述靶标片段的DNA区段测序；步骤6、选择两个等位OsCAD2基因都出现功能缺失突变的再生株系，进行表型观察，选取颖壳颜色变褐的株系。