[发明专利]一种简便灵敏通用型的基因检测方法

摘要

一种简便灵敏通用型的基因检测方法，该方法利用量子点掺杂产生的荧光信号对目标基因进行检测，通过荧光强度来检测待测靶基因的浓度以及靶基因中单个碱基的突变。其过程包括DNA探针的设计，探针与金属离子的结合，结合了金属离子的探针与待测靶基因的杂交从而释放金属离子，量子点与上述溶液中金属离子发生离子交换反应获得掺杂型量子点并产生特异性的荧光信号以进行检测。相较于传统的荧光探针检测方法，这种方法无需对探针进行任何化学标记和修饰，同时全过程均只需要在室温下操作即可；检测灵敏度高，检测限可以达到皮摩尔每升级别；特异性强，能够区分基因中单个碱基的突变；还具有通用性，理论上可以对所有的基因序列进行检测。

主权项

一种简便灵敏通用型的基因检测方法，其特征在于：第一部分：事先建立待测靶基因的浓度与对应产物合成的量子点的荧光光谱波峰强度之间的相关标准曲线，所述相关标准曲线的建立包括以下步骤：第一步，根据待测靶基因的基因序列，设计含有T‑T碱基对并且具有发卡结构的DNA探针；第二步，将所述第一步中得到的DNA探针中的T‑T碱基对与二价金属汞离子特异性结合，形成含有T‑Hg²⁺‑T 结构并且具有发卡结构的DNA探针；其中，所述含有T‑Hg²⁺‑T 结构并且具有发卡结构的DNA 探针中的T‑T 碱基对与二价金属汞离子的物质的量之比为1:1；第三步，将所述第二步中得到的DNA探针与多组已知梯度浓度的待测靶基因杂交，以完全释放或部分释放所述T‑Hg²⁺‑T 结构中的二价金属汞离子；第四步，在所述第三步的基础上，向各组体系中加入相同量的无荧光的ZnSe量子点以进行离子交换反应，得到掺杂型的ZnHgSe 量子点； 第五步，将所述第四步中获得的掺杂型的ZnHgSe 量子点经激光照射后，检测各组ZnHgSe 量子点的荧光光谱波峰强度，最后根据已知梯度浓度的待测靶基因，做出荧光光谱波峰强度与待测靶基因浓度的相关标准曲线；第二部分：未知浓度的待测靶基因的检测方法由以下步骤组成：第一步，针对未知浓度的待测靶基因，按照所述第一部分中第一步至第四步的方法获得与未知浓度的待测靶基因对应的掺杂型的ZnHgSe 量子点；第二步，将所述第二部分的第一步获得的掺杂型的ZnHgSe 量子点经激光照射后，检测出该ZnHgSe 量子点的荧光光谱波峰强度，再将该荧光光谱波峰强度与所述第一部分中得到的相关标准曲线进行比对，最终获得所述未知浓度的待测靶基因的浓度值。