[发明专利]一种获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵方法

摘要

一种获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵方法，它涉及一种混菌发酵方法。本发明要解决现有技术中将两种具有拮抗作用的菌种在分别培养、分别发酵和分别施用的工艺繁琐及混合发酵液的抗菌活性低的问题。本发明的方法：一、将侧孢短芽孢杆菌BL-21和枯草芽孢杆菌HNDF2分别培养，得斜面菌种；二、将步骤一得到的斜面菌种经再培养，得一级种子液；三、将步骤二得到的一级种子液经再培养，得二级种子液；四、混菌发酵液的制备，即完成获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵。本发明应用在微生物发酵领域。

主权项

一种获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵方法，其特征在于获得抗植物病原真菌活性物质的混菌发酵方法，按下述步骤实现：一、制备两菌的斜面菌种：将侧孢短芽孢杆菌BL‑21和枯草芽孢杆菌HNDF2分别接种到牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，在温度为25℃～37℃的条件下恒温培养18h～24h后，即得到侧孢短芽孢杆菌BL‑21的斜面菌种和枯草芽孢杆菌HNDF2的斜面菌种；二、制备两菌的一级种子液：从步骤一制备得到的侧孢短芽孢杆菌BL‑21的斜面菌种和枯草芽孢杆菌HNDF2的斜面菌种上分别取一环菌种，再分别接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为20℃～37℃、振荡速率为50r/min～350r/min的条件下，震荡培养24h～96h，得到侧孢短芽孢杆菌BL‑21的一级种子液和枯草芽孢杆菌HNDF2的一级种子液；其中，所述的侧孢短芽孢杆菌BL‑21的菌悬液与牛肉膏蛋白胨液体培养基的体积比为（1～3）:100，所述的枯草芽孢杆菌HNDF2的菌悬液与牛肉膏蛋白胨液体培养基的体积比为（1～3）:100；三、制备两菌的二级种子液：将步骤二制备得到的侧孢短芽孢杆菌BL‑21的一级种子液和枯草芽孢杆菌HNDF2的一级种子液分别接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为20℃～37℃、振荡速率为50r/min～350r/min的条件下，震荡培养24h～96h，得到侧孢短芽孢杆菌BL‑21的二级种子液和枯草芽孢杆菌HNDF2的二级种子液；其中，所述的侧孢短芽孢杆菌BL‑21的一级种子液与牛肉膏蛋白胨液体培养基的体积比为（1～3）:100，所述的枯草芽孢杆菌HNDF2的一级种子液接种与牛肉膏蛋白胨液体培养基的体积比为（1～3）:100；四、混菌发酵液的制备：将步骤三制备得到侧孢短芽孢杆菌BL‑21的二级种子液和枯草芽孢杆菌HNDF2的二级种子液同时接种到发酵培养基中，在温度为20℃～37℃、振荡速率为50r/min～350r/min的条件下，震荡培养24h～96h，得到混菌发酵液；其中，所述的侧孢短芽孢杆菌BL‑21的二级种子液与发酵培养基的体积比为（1～3）:100，所述的侧孢短芽孢杆菌BL‑21与枯草芽孢杆菌HNDF2的二级种子液的体积比为1:1；步骤四中所述发酵培养基每1L发酵培养基由浓度为2g/L～20g/L的碳源、2g/L～20g/L的氮源、0g/L～6g/L的碳酸钙、0g/L～15g/L的NaCl、0g/L～1g/L的KH₂PO₄和0g/L～2g/L的MnSO₄和微量元素组成，所述的微量元素由质量百分数为0～0.005%FeSO₄和0～0.003%ZnSO₄组成，所述的发酵培养基pH为5.5～9.0；所述的碳源为葡萄糖、甘露醇、核糖、纤维二糖、麦芽糖、可溶性淀粉、红薯粉、蔗糖、麸皮或果糖；所述的氮源为蛋白胨、鱼粉、豆饼粉、牛肉膏、酵母膏、硫酸铵、氯化铵或硝酸铵。