[发明专利]细胞饲养层及其在培养人原代肿瘤细胞中的应用

摘要

本发明公开了一种细胞饲养层，是通过以下方法制备得到的：采用DMEM培养基培养BALB3T3细胞，细胞贴壁培养至铺满培养瓶70%～80%时，进行照射。以3000cGy作为放射剂量进行X线照射；照射后改用改良F培养基进行培养；培养8小时后，所得培养物即为细胞饲养层。所述细胞饲养层可以用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞。本发明改进了细胞饲养层的细胞类型和制备方法，制备饲养层的3T3细胞较J2细胞容易获得，且在其培养的过程中细胞浓度与状态容易控制。用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞时，能更好地促进原代肿瘤细胞的生长，获得更高比例的人肿瘤干细胞（CD44阳性细胞数提高约80%）。

主权项

一种细胞饲养层，通过以下方法制备得到：采用DMEM培养基培养BALB3T3细胞，细胞贴壁培养至铺满培养瓶70%～80%时，进行照射。以3000cGy作为放射剂量进行X线照射；照射后改用改良F培养基进行培养；培养8小时后，所得培养物即为细胞饲养层。制备好的饲养层在一周之内都可使用，超过一周应以同样方法重新制备。若照射后的BALB3T3细胞暂时不作为细胞饲养层使用，也可收集冻存或用原DMEM培养基继续培养，待使用前8小时左右再换成改良F培养基制备细胞饲养层；所述改良F培养基的配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F‑12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白3～5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.2～0.5μg/ml；胰岛素3～6μg/ml；霍乱毒素B6～10ng/ml；人表皮生长因子EGF9～12ng/ml；腺嘌呤22～25μg/ml；Y‑276327～9μmol/L。