[发明专利]细胞饲养层及其在培养人原代肿瘤细胞中的应用

权利要求书

1.一种细胞饲养层，通过以下方法制备得到：采用DMEM培养基培养BALB3T3细胞，细胞贴壁培养至铺满培养瓶70%～80%时，进行照射。以3000cGy作为放射剂量进行X线照射；照射后改用改良F培养基进行培养；培养8小时后，所得培养物即为细胞饲养层。制备好的饲养层在一周之内都可使用，超过一周应以同样方法重新制备。若照射后的BALB3T3细胞暂时不作为细胞饲养层使用，也可收集冻存或用原DMEM培养基继续培养，待使用前8小时左右再换成改良F培养基制备细胞饲养层；

所述改良F培养基的配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白3～5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.2～0.5μg/ml；胰岛素3～6μg/ml；霍乱毒素B6～10ng/ml；人表皮生长因子EGF9～12ng/ml；腺嘌呤22～25μg/ml；Y-276327～9μmol/L。

2.根据权利要求1所述的细胞饲养层，其特征在于：所述放射剂量为3000cGy。

3.根据权利要求1所述的细胞饲养层，其特征在于：所述进行X线照射的具体方式为：照射时仪器从0开始加量，达到需要的放射剂量立即停止。

4.根据权利要求1所述的细胞饲养层，其特征在于：所述采用改良F培养基进行培养的培养条件为：保持温度37℃，CO₂浓度为5%。

5.根据权利要求1所述的细胞饲养层，其特征在于：所述改良F培养基的配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.4μg/ml；胰岛素5μg/ml；霍乱毒素B8.4ng/ml；人表皮生长因子EGF10ng/ml；腺嘌呤24μg/ml；Y-276327μmol/L。

6.权利要求1所述的细胞饲养层的制备方法，其特征在于：采用DMEM培养基培养BALB3T3细胞，细胞贴壁培养至铺满培养瓶70%～80%时，进行照射。以3000cGy作为放射剂量进行X线照射；照射后改用改良F培养基进行培养；培养8小时后，所得培养物即为细胞饲养层。

所述改良F培养基的配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白3～5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.2～0.5μg/ml；胰岛素3～6μg/ml；霍乱毒素B6～10ng/ml；人表皮生长因子EGF9～12ng/ml；腺嘌呤22～25μg/ml；Y-276327～9μmol/L。

7.根据权利要求6所述的细胞饲养层的制备方法，其特征在于：所述放射剂量为3000cGy。

8.根据权利要求6所述的细胞饲养层的制备方法，其特征在于：所述改良F培养基的配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.4μg/ml；胰岛素5μg/ml；霍乱毒素B8.4ng/ml；人表皮生长因子EGF10ng/ml；腺嘌呤24μg/ml；Y-276327μmol/L。

9.权利要求1～5中任一项所述的细胞饲养层在培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述人原代肿瘤细胞包括人原代结肠癌细胞。