[发明专利]肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法及使用方法

摘要

本发明公开了肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法及使用方法。本发明从肺炎衣原体CpnAR39株基因中获取cHSP60的序列，设计引物序列；用RT-PCR法扩增cHSP60的cDNA，并将cHSP60与原核表达载体pET28a连接，构建pET28a-cHSP60重组质粒；经过克隆、酶切鉴定及核苷酸测序证实，获得重组的表达载体pET28a-cHSP60，经过IPTG的诱导在E.coliBL21菌株中产生cHSP60-His融合蛋白，获得的cHSP60-His融合蛋白进行体内外实验。得到的cHSP60融合蛋白有生物活性，可进行与衣原体相关感染的研究，不局限于以病人进行研究。

主权项

一种肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法，肺炎衣原体热休克蛋白60即cHSP60，该方法构建cHSP60的原核表达系统pET28a‑cHSP60，制备cHSP60‑组氨酸融合蛋白，SEQ ID NO：1，显示cHSP60‑组氨酸融合蛋白的核苷酸序列；其特征在于：所述肺炎衣原体热休克蛋白60的可溶性蛋白的制备方法包括以下步骤：步骤（1）从肺炎衣原体Cpn AR39株基因中获取cHSP60的序列，设计引物序列；引物序列：上游引物，5’‑CCGCATATGGTCGCTAAAAACAT‑3’；下游引物，5’‑CCAGCTCGAGTTAATAGTCCATTCCTGCGC‑3’；步骤（2）用RT‑PCR法扩增cHSP60的cDNA，并将cHSP60与原核表达载体pET28a‑c(+)连接，构建pET28a‑cHSP60重组质粒；RT‑PCR法扩增体系为：模板cDNA为2.5μl，5’引物与3’引物各加0.4μl，2xTaq Plus PCR MasterMix为10μl，最后加双蒸水补足到20μl；反应条件为：95℃预变性5分钟；95℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸90秒，进行30个循环；72℃延伸5分钟；步骤（3）经过克隆、酶切鉴定及核苷酸测序证实，获得重组的表达载体pET28a‑cHSP60，经过IPTG的诱导在E.coli BL21菌株中产生cHSP60‑His融合蛋白。