[发明专利]一种昆虫触角及附肢的扫描电镜样品处理方法

摘要

本发明涉及一种昆虫触角及附肢的扫描电镜样品处理方法，属于实验样品处理技术领域。本发明通过麻醉，解剖，戊二醛－甲醛磷酸盐缓冲液固定，清洗和乙醇梯度脱水样品，从而得到扫描电镜上镜前样品。本发明解决了在昆虫触角及附肢扫描电镜前期处理中，触角及附肢鳞片去除不完全，样品表面清洗不彻底，固定液浸透困难，样品变脆易折断等问题，本发明处理后的样品表面结构完好，没有变形和污染，且组织表面充分暴露，有良好导电性能，有效的反映出样品表面的真实状态。

主权项

一种昆虫触角及附肢的扫描电镜样品处理方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品固定液、清洗液、麻醉液的准备a. 样品固定液：按重量百分比，戊二醛－甲醛磷酸盐缓冲液组成为戊二醛1‑4%，甲醛30‑45%，余量为磷酸盐缓冲液；b. 样品清洗液：清洗液Ⅰ：配制0.05mol/L的碳酸氢钠溶液，调PH至10，然后加入占碳酸氢钠溶液体积2.5‑5%的蛋清，即得清洗液Ⅰ；清洗液Ⅱ：其成分组成为氯化钠6.0‑7.2g，次氯酸钠0.12‑0.16g，氯化钙0.12‑0.14g，氯化钾0.11‑0.15g和蒸馏水1L；c. 样品麻醉液：配制50%的酒精水溶液，加入乙醚，使乙醚最终体积浓度达到1.2‑3.5%；（2）麻醉昆虫：用指形管扣住成虫，用镊子夹住棉球蘸麻醉液，棉球堵住平放的管口完全麻醉昆虫；（3）解剖昆虫：在昆虫解剖显微镜下，用镊子和解剖剪剪取步骤（2）处理后的昆虫的完整触角及附肢；（4）固定样品：将解剖后的样品迅速投入装有固定液的离心管中离心，直到样品完全到达固定液液面以下；接着摇床振荡，使得固定液与样品混匀，置于室温下固定2‑8h；（5）清洗样品：经步骤（4）固定后的样品，轻移到步骤（1）新制的清洗液Ⅰ中，边浸泡边在摇床上振荡，第一次振荡20‑40min；第二次及以后清洗换取清洗液Ⅱ，每次振荡10‑15min，直到在解剖显微镜下看不到触角及附肢上的鳞片或者在最后一次清洗废液中看不到表层蜡质层漂浮；最后用双蒸水洗2‑4次，每次5‑10min；（6）样品脱水：乙醇梯度脱水，然后置于100%乙醇保存；（7）粘样观察：用小毛笔小心轻取触角或者附肢样品，双面胶粘样，面朝上，通风橱中挥发完毕酒精，接着昆虫解剖显微镜初步观察，然后上扫描电镜观察。