[发明专利]一种桃芽变鉴定方法

摘要

本发明公开了一种桃芽变的鉴定方法，包括以下步骤：首先进行连续3代嫁接鉴定，观测表型性状的稳定性，对于连续3代嫁接后，性状稳定的疑似芽变，采集嫩叶和亲本的嫩叶，提取基因组DNA，分别用SSR引物和SRAP引物对DNA进行PCR扩增，然后对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳区分芽变，亲本及疑似芽变品种电泳条带有差异，则疑似芽变品种为芽变。本发明成功地鉴定了‘小白桃’和它的早熟芽变‘津柳早红’桃。本发明操作简便、用途广泛，节约了大量的人力和物力，便于推广。

主权项

一种桃芽变的鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：首先进行连续三代嫁接鉴定，观测表型性状的稳定性，对于连续三代嫁接后，性状稳定的疑似芽变，采集嫩叶和亲本的嫩叶，提取基因组DNA，分别用SSR引物和SRAP引物对DNA进行PCR扩增，然后对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳区分芽变，亲本及疑似芽变品种电泳条带有差异，则疑似芽变品种为芽变；所述的SSR引物包括：BPPCT001、BPPCT009、、BPPCT015、BPPCT016、BPPCT020、BPPCT028、BPPCT030、CPPCT008、CPPCT013、CPPCT022、CPPCT030、UDP98‑411、UDP96‑019、UDP97‑401、UDP96‑008；所述的SRAP引物包括：Me1～6，Em1～6；所述的PCR反应体系包括：10ng DNA模板、1.5mmol/L MgCl2、0.15mmol/L dNTPs、0.55μmol/L引物、1.0U Taq DNA聚合酶、1×PCR buffer，反应总体积为10μL；所述的PCR扩增程序包括：SSR标记扩增程序：95℃预变性5min,94℃1min、53℃1min、72℃1min,共35个循环;72℃8min；SRAP标记扩增程序：SRAP反应程序共40个循环，94℃预变性5min；前5个循环：94℃变性1min，35℃复性1min，72℃延伸1min；后35个循环：94℃变性1min，50℃复性1min，72℃延伸1min；循环结束后72℃延伸10min。