[发明专利]PCR扩增基因核转悬浮动物细胞的方法在审
| 申请号： | 201410010269.8 | 申请日： | 2014-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN103740760A | 公开（公告）日： | 2014-04-23 |
| 发明（设计）人： | 吴康;范小勇;黄家颖;赵旭杰 | 申请（专利权）人： | 上海市公共卫生临床中心 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 牛山;陈少凌 |
| 地址： | 201508 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种生物技术领域的PCR扩增基因核转悬浮动物细胞的方法，包括如下步骤：以重组目的基因的表达质粒为模板，设计PCR引物；其中，正向PCR引物位于质粒启动子（目的基因对应启动子）上游，反向PCR引物位于质粒转录终止子（目的基因对应终止子）下游；以重组目的基因的表达质粒为PCR模板，通过所设计的PCR引物进行PCR扩增；回收PCR产物；选取PCR产物，按照Lonza公司核转试剂盒标准操作程序进行细胞转染。与核转质粒相比，核转PaGene能够显著降低悬浮动物细胞的死亡率；PaGene在保证核转悬浮动物细胞较低死亡率的情况下，转染效率亦没有显著降低或降低很少。 | ||
| 搜索关键词： | pcr 扩增 基因 悬浮 动物 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种PCR扩增基因核转悬浮动物细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，以重组目的基因的表达质粒为模板，设计PCR引物；其中，正向PCR引物位于质粒启动子上游，反向PCR引物位于质粒转录终止子下游；步骤二，以重组目的基因的表达质粒为PCR模板，通过所设计的PCR引物进行PCR扩增；PCR扩增所用的DNA聚合酶为具有校正功能的高保真DNA聚合酶；步骤三，回收PCR产物，即PaGene，并定量及测定A260/A280、A260/A230比值；A260/A280和A260/A230比值需≥1.8，以保证PaGene具有较高的完整性和纯度；步骤四，选取PaGene，按照Lonza公司核转试剂盒标准操作程序进行悬浮动物细胞转染，所用PaGene用与对应质粒相同摩尔数的剂量进行核转，进而完成PaGene核转悬浮动物细胞。
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