[发明专利]用于在丝状真菌中产生位点特异性突变的方法在审
| 申请号： | 201380063554.X | 申请日： | 2013-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN104837993A | 公开（公告）日： | 2015-08-12 |
| 发明（设计）人： | J·维恩 | 申请（专利权）人： | 诺维信公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 顾小曼 |
| 地址： | 丹麦*** | 国省代码： | 丹麦;DK |
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| 摘要： | 本发明提供了在一种有待直接地转化进丝状真菌宿主中的编码感兴趣多肽的基因中产生定点突变的方法，其中不需要依靠中间宿主如大肠杆菌来产生充足的遗传材料以成功地转化该真菌宿主。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 丝状 真菌 产生 特异性 突变 方法 | ||
【主权项】：
一种提供位点特异性突变的变体多肽的方法，该方法包括下述步骤：a)提供一种甲基化的模板常染色体丝状真菌复制型双链环状DNA载体，该甲基化的模板常染色体丝状真菌复制型双链环状DNA载体包括一种编码亲本多肽的亲本多核苷酸；b)提供一对针对该亲本多核苷酸的端对端非重叠PCR引物，其中至少一个引物是诱变的；c)用该PCR引物对进行该模板载体的PCR扩增以产生全长的载体突变的PCR片段；d)用一种适合的甲基化特异性核酸酶去除该模板载体；e)通过自连环化这些突变的PCR片段；并且f)将这些环化的突变的PCR片段直接转化至丝状真菌宿主细胞中以表达这些变体多肽，其中将这些PCR引物在该PCR扩增前磷酸化，或者将这些PCR片段在该自连步骤前或期间磷酸化，以便允许这些引物的端对端连接以环化这些突变的PCR片段。
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