[发明专利]一种基于化学发光反应的甲基化酶检测探针、检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供了一种基于化学发光反应的甲基化酶检测探针、检测试剂盒以及检测方法。本发明提供的基于化学发光反应的甲基化酶检测探针不需要任何的标记和修饰，设计简单。而且本发明将甲基化酶和特定的依赖甲基化的内切酶的作为组合使用，只有两者的相互作用才能将发卡结构的检测探针切开，产生引物信号，从而产生化学发光信号；而任何其他甲基化酶作用发卡结构后都不能被该组合之外的内切酶识别，不能产生引物信号，从而没有化学发光信号，使本发明的特异性非常高。此外，本发明的技术方案将连接酶催化效率高与化学发光信号显著增强的两种优势串联起来，极大地提高了检测灵敏度。本发明在疾病早期诊断和药物筛选方面具有广阔的应用价值。

主权项

一种基于化学发光反应的甲基化酶检测探针，其特征在于，所述检测探针包括发卡探针、引物‑1和引物‑2，所述发卡探针依次包括茎‑1、环以及茎‑2，所述茎‑1、环以及茎‑2均为单链脱氧核苷酸，所述茎‑1与茎‑2互补形成双链DNA（1），所述双链DNA（1）具有甲基化酶的识别位点以及依赖甲基化的内切酶的酶切序列，其中，所述甲基化酶的识别位点与环的末端碱基距离为2～8bp；所述引物‑1为单链脱氧核苷酸，所述引物‑1具有至少一个片段A，所述片段A的5’端或3’端具有切刻内切酶酶切位点的互补序列，所述片段A的核苷酸序列与DNA酶序列互补，其中，所述DNA酶序列为具有氯高铁血红素结合位点的多G核苷酸序列；所述引物‑1还具有与所述发卡探针的部分核苷酸序列互补的序列，所述引物‑2为单链脱氧核苷酸，所述引物‑2与所述引物‑1两端的核苷酸序列互补。