[发明专利]一种表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蚕重组杆状病毒的纯化方法有效
| 申请号： | 201310705625.3 | 申请日： | 2013-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN104711232B | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 张耀洲 | 申请（专利权）人： | 特菲（天津）生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/02 | 分类号： | C12N7/02;C12R1/93 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州甬致专利代理事务所(普通合伙) 33228 | 代理人： | 沈亚芳 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区天津开发区洞庭路*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供一种表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蚕重组杆状病毒的纯化方法，它以感染了重组杆状病毒NPV‑gp64‑HA的蚕蛹为原料，与无菌水进行混合后进行匀浆，取匀浆液低速离心，取低速离心的稠状溶液高速离心，取高速离心的上清用0.1μm膜包超滤，取截留液超速离心，得到黑团用超滤液重悬过夜，蔗糖密度梯度离心，然后取区带后活性高的样品，300KD膜包超滤，0.22μm滤膜过滤，收集截留液，获得表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的病毒粒子。该方法可以获得具有较纯的在家蚕杆状病毒表面展示有禽流感H5N1HA蛋白的病毒粒子。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表面 展示 h5n1 流感病毒 ha 蛋白 家蚕 重组 杆状病毒 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蚕重组杆状病毒的纯化方法，其特征在于：以感染了重组杆状病毒NPV‑gp64‑HA的蚕蛹为原料，与无菌水进行混合后进行匀浆，取匀浆液低速离心，取低速离心的稠状溶液高速离心，取高速离心的上清用0.1μm膜包超滤，取截留液超速离心，得到黑团用超滤液重悬过夜，蔗糖密度梯度离心，然后取区带后活性高的样品，300KD膜包超滤，0.22μm滤膜过滤，收集截留液，获得表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的病毒粒子；所述HA蛋白序列如SEQ ID NO :10所示；所述低速离心速率为8000rpm；所述高速离心的速率为15000rpm；所述超速离心的速率为50000 rpm；所述蔗糖密度梯度离心的速率为22000rpm。
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