[发明专利]基于滚环扩增和超分子适体对可卡因电化学检测的方法

摘要

发明公开了一种基于滚环扩增和超分子适体对可卡因进行电化学检测的方法，在洗净的金电极上滴加适体片段Co3S，冰箱中过夜后取出封闭，在金电极上滴加适体片段Co3B和待测样品，37℃下反应完后，再滴加链酶亲和素溶液温育，然后加入环化DNA溶液温育，滚环扩增，加入检测探针杂交，进行DPV信号检测。本发明首次利用滚环扩增与超分子适体对可卡因进行电化学检测，极大提高了可卡因检测的灵敏度和特异性，使得检测的线性范围达到10～500nM。使用相同体积和相同浓度的链酶亲和素溶液和环化DNA，将识别元件和放大元件分开，仅利用其桥接作用，减少了空白信号，极大提高了检测的灵敏度和线性范围。

主权项

一种基于滚环扩增和超分子适体对可卡因电化学检测的方法，包括以下步骤：1）将裸金电极抛光，洗涤，然后浸入食人鱼溶液中10～15min，再取出清洗、干燥；2）将用TE缓冲液配制的巯基标记的适体片段Co3S滴加于上述金电极上，置于4℃冰箱过夜；3）将步骤2中的金电极取出，冲洗,用6‑巯基‑1‑己醇封闭1～1.5h，再次冲洗金电极，然后用鲑鱼精DNA和2%BSA混合溶液封闭金电极2～3h；4）将步骤3中封闭后的金电极取出冲洗，在金电极上滴加PB缓冲液配制的生物素标记的适体片段Co3B和待测样品溶液，然后在37℃下反应40～50min；5）将步骤4中的金电极取出冲洗，加入PB缓冲液配制的链酶亲和素溶液，37℃温育30～45min,取出冲洗；6）在步骤5中的金电极上加入PB缓冲液配制的环化DNA溶液，37℃温育30～45min，取出冲洗；7）在步骤6中的金电极上加入含dNTP、phi29DNA聚合酶的滚环扩增反应液，37℃滚环扩增1～1.5h，取出冲洗；8）在步骤7中的金电极上加入用2×SSC杂交液配制的生物素修饰的检测探针，37℃杂交1～1.5h，用DEA缓冲液清洗电极；9）在步骤8中的金电极上加入用含有0.8%BSA的DEA缓冲液配制的1.25μg/mL的ST‑AP，37℃反应30～45min，用DEA缓冲液冲洗，在用DEA缓冲液配制的0.75mg/mLα‑NP底物溶液中进行示差脉冲伏安法DPV信号检测，根 据标准曲线，得到待检样品中可卡因的浓度。