[发明专利]一种原料乳及牛奶中植物源性蛋白成分鉴别方法

摘要

本发明公开了一种原料乳及牛奶中植物源性蛋白成分鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤：一、DNA提取，设计识别植物源性成分的特异性的引物和荧光探针，提取样品基因组DNA，利用实时荧光定量PCR的方法进行鉴别判定，所述特异性的引物的序列为：上游引物5｀-GGATTGAGCCTTGGTATGGA-3｀；下游引物5｀-TTTCGGAAAACAGGATTTGG-3｀；所述探针序列为：荧光探针5｀-CAAATTCAGAGAAACCCTGGA-3｀；二、荧光定量PCR检测。本发明的有益效果是：以植物叶绿体基因保守区域片段为检测目标，设计出特异的引物和荧光探针，建立起来的荧光定量PCR鉴别方法，该种鉴别方法灵敏度强、特异性高、快速简单。

主权项

一种原料乳及牛奶中植物源性蛋白成分鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤：一、DNA提取设计识别植物源性成分的特异性的引物和荧光探针，提取样品基因组DNA，利用实时荧光定量PCR的方法进行鉴别判定，所述特异性的引物的序列为：上游引物5｀‑GGATTGAGCCTTGGTATGGA‑3｀；下游引物5｀‑TTTCGGAAAACAGGATTTGG‑3｀；所述探针序列为：荧光探针5｀‑CAAATTCAGAGAAACCCTGGA‑3｀；二、荧光定量PCR检测采用荧光定量PCR反应体系总量为19.3‑29.8μL，体系组成包括为荧光定量PCR反应液12‑13μL，浓度为10μmol的上游引物0.5‑1.5μL，浓度为10μmol的下游引物0.5‑1.5μL，浓度为10μmol的探针0.3‑0.8μL，模板DNA1‑3μL，ddH2O5‑10μL，扩增程序为：将荧光定量PCR反应体系中的各试剂加入到荧光定量八联管，同时设立阴性对照管和阳性对照，置于实时荧光定量PCR仪，将控制温度在94‑96℃对荧光定量PCR反应体系进行变性处理1‑2 min，保持温度在94‑96℃变性处理5‑10s, 然后降低温度至55‑60℃进行退火处理25‑35s,退火完毕后，升高温度至72℃进行延伸处理25‑50s，将上述的变性处理‑退火处理‑延伸处理三个步骤按上述的顺序和工艺要求重复35‑45个循环,根据不同荧光探针标记在55‑60℃结束开始收集荧光信号。