[发明专利]一种原料乳及牛奶中植物源性蛋白成分鉴别方法

权利要求书

1.一种原料乳及牛奶中植物源性蛋白成分鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤：

一、DNA提取

设计识别植物源性成分的特异性的引物和荧光探针，提取样品基因组DNA，利用实时荧光定量PCR的方法进行鉴别判定，

所述特异性的引物的序列为：

上游引物5｀-GGATTGAGCCTTGGTATGGA-3｀；

下游引物5｀-TTTCGGAAAACAGGATTTGG-3｀；

所述探针序列为：

荧光探针5｀-CAAATTCAGAGAAACCCTGGA-3｀；

二、荧光定量PCR检测

采用荧光定量PCR反应体系总量为19.3-29.8μL，体系组成包括为荧光定量PCR反应液12-13μL，浓度为10μmol的上游引物0.5-1.5μL，浓度为10μmol的下游引物0.5-1.5μL，浓度为10μmol的探针0.3-0.8μL，模板DNA1-3μL，ddH₂O5-10μL，扩增程序为：将荧光定量PCR反应体系中的各试剂加入到荧光定量八联管，同时设立阴性对照管和阳性对照，置于实时荧光定量PCR仪，将控制温度在94-96℃对荧光定量PCR反应体系进行变性处理1-2 min，保持温度在94-96℃变性处理5-10s, 然后降低温度至55-60℃进行退火处理25-35s,退火完毕后，升高温度至72℃进行延伸处理25-50s，将上述的变性处理-退火处理-延伸处理三个步骤按上述的顺序和工艺要求重复35-45个循环,根据不同荧光探针标记在55-60℃结束开始收集荧光信号。

2.根据权利要求1所述的一种原料乳及牛奶中植物源性蛋白成分鉴别方法，其特征在于：所述荧光探针5｀端为FAM、HEX、ROX、JOE、FAM、SYBR Green I 、TET 、Cy3、Cy5或VIC荧光物质标记，所述荧光探针3｀端可以连接TAMRA或BHQ荧光淬灭剂。

3.根据权利要求1所述的一种原料乳及牛奶中植物源性蛋白成分鉴别方法，其特征在于：所述植物源成分为大豆、小麦、水稻或玉米。