[发明专利]一种检测烟草黑胫病菌对杀菌剂敏感性的方法

摘要

本发明公开了一种检测烟草黑胫病菌对杀菌剂敏感性的方法，包括以下步骤：用利马豆液体培养基或燕麦液体培养基稀释烯酰吗啉配置各种质量浓度的药剂；将烟草黑胫病菌在利马豆固体培养基平板上培养，经V8液体培养基诱导得到游动孢子悬浮液，将其浓度调整为1×10⁴个/mL；将96孔微孔板置于监控培养箱中，28℃黑暗条件下培养72h，采用生长曲线监控软件读取0-72h小时黑胫病菌生长曲线的数据；培养0和72h时，采用浊度测定软件测定590nm每孔黑胫病菌的OD值，按照公式(1)计算杀菌剂对黑胫病菌孢子萌发、菌丝生长的抑制率，并计算药剂对菌株的EC₅₀值。本发明检测烟草黑胫病菌对杀菌剂敏感性简便、快速、高效、准确。

主权项

1.一种检测烟草黑胫病菌对杀菌剂敏感性的方法，包括以下步骤：（1）用利马豆液体培养基或燕麦培养基稀释烯酰吗啉，配置各种质量浓度的药剂；（2）将烟草黑胫病菌在利马豆固体培养基平板上培养4d，取菌落1/3处直径为5mm的菌丝块10块，放入盛有20mL10%V8培养液培养皿中，光照培养4d后菌丝表面形成大量的孢子囊；将形成孢子囊的黑胫病平板置于4℃冰箱低温处理30min，然后再置于室温2h，从溶液中收集游动孢子悬浮液，将其浓度调整为1×10⁴个/mL，贮存、待用；（3）8通道电动移液器将8种不同质量浓度的药剂每孔140μL加入到96孔微孔板中，并设置空白对照组；无菌条件下，在96孔微孔板中每孔加入1×10⁴个/mL的游动孢子悬浮液10μL；盖好96孔板板盖，将96孔微孔板置于监控培养箱中，28℃黑暗条件下培养72h，采用生长曲线监控软件读取0-72h小时黑胫病菌生长曲线的数据；培养0和72h时，采用浊度测定软件测定590nm每孔黑胫病菌的OD值(处理0和72h的吸光度值分别记为OD₀和OD₇₂₎，按照公式(1)计算杀菌剂对黑胫病菌孢子萌发的抑制率，并计算药剂对菌株孢子萌发的EC₅₀值；。