[发明专利]一种猪圆环病毒2型的生产方法

摘要

本发明公开了一种应用生物反应器培养pK-15A1#细胞生产猪圆环病毒2型的生产工艺，包括如下技术步骤：（1）选择pK-15A1#细胞作为增殖圆环病毒2型用细胞；（2）采用生物反应器为细胞培养的工具；（3）同步接毒的病毒培养工艺；（4）pK-15A1#细胞在生物反应器中微载体上的培养；（5）猪圆环病毒2型病毒在生物反应器微载体上细胞内的增殖培养；（6）猪圆环病毒2型病毒培养物的收获。本发明能降低生产成本，投入产出比较传统转瓶生产工艺提高5-10倍。生产周期短，占用场地小，易于快速扩大生产规模，环境污染少且易于处理，自动化程度高，用人少，质量稳定，可显著降低成本、提高疫苗产量和质量。

主权项

一种猪圆环病毒2型的生产方法，其特征在于：选择生物反应器作为培养工具；选择微载体作为细胞贴附的生长载体；选择pK‑15A1#细胞作为制苗用细胞；(1)、制苗用细胞的传代与接种将致密单层的pK‑15A1#细胞经消化液消化分散后取样计数，用含10%NBCS的MEM生长液将pK‑15A1#细胞调整为2‑3×105个/ml，再接种到生物反应器上进行培养；所述培养条件为：温度为37.0℃±0.2℃，pH值为7.40，DO为40%‑80%，转速为40rpm‑80rpm；(2)、制苗用细胞的接毒将在生物反应器中培养的pK‑15A1#细胞按照体积比1%‑5%接种PCV2病毒，接毒后按照所述培养条件继续培养；(3)、接毒后的培养接毒后在细胞培养12h时补加200μmol/L的必需氨基酸；在细胞培养约24h时更换含10%NBCS的MEM生长液一次；在细胞培养48h时，细胞长满微载体50%‑60%，吸出MEM生长液后，用预热的无菌PBS洗涤两次，再加入含2%NBCS和1%D‑氨基葡萄糖的MEM维持液继续培养；（4）、病毒的收获与效价检测维持液培养后约54h后停止搅拌，静置5min后吸出上清作为一收，此后加入MEM维持液继续培养48h，静置后吸出上清，收获为二收，此后加入MEM维持液继续培养48h，此时将微载体和培养液一起全部收获，冻融三次后作为抗原保存。