[发明专利]SV40LT基因诱导构建T淋巴细胞模型及其细胞库在审
| 申请号： | 201310403992.8 | 申请日： | 2013-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104419724A | 公开（公告）日： | 2015-03-18 |
| 发明（设计）人： | 翁炳焕;黄荷凤;徐晨明;鲁林荣;袁武锋;张燕 | 申请（专利权）人： | 翁炳焕 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C40B50/06;C40B40/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 317300 浙江省仙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及用于医学研究领域的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物特性者作为T淋巴细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库，以建立在体外长期传代培养T淋巴细胞的方法并用于体外研究T淋巴细胞免疫机制。 | ||
| 搜索关键词： | sv40lt 基因 诱导 构建 淋巴细胞 模型 及其 细胞 | ||
【主权项】：
一种用于医学研究领域的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(‑)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物特性者作为T淋巴细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因介导T淋巴细胞模型及其细胞库，以建立在体外长期传代培养T淋巴细胞的方法并用于体外(替代人体或动物直接试验)研究T淋巴细胞免疫机制。
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