[发明专利]SV40LT基因诱导构建T淋巴细胞模型及其细胞库

说明书

技术领域

本发明涉及SV40LT基因(猴肾病毒40大T抗原基因)诱导(介导)构建T淋巴细胞模型及其细胞库，主要用于医学免疫学研究领域，为开展T淋巴细胞或与T淋巴细胞相关的各种研究提供细胞模型并保存其科研资源。

背景技术

人类血液中的有形成份分为红细胞、白细胞和血小板。其中的白细胞以中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞为主。淋巴细胞又分为T淋巴细胞(T细胞)和B淋巴细胞(B细胞)等。

已知T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成，是淋巴细胞中数量最多，功能最复杂的一类细胞。按其功能可分为三个亚群：辅助性T细胞、抑制性T细胞和细胞毒性T细胞。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群。按免疫应答中的功能不同，又可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：辅助性T细胞(Helper T cells，Th)，具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；抑制性T细胞(Suppressor T cells，Ts)，具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；效应T细胞(Effector T cells，Te)，具有释放淋巴因子的功能；细胞毒T细胞(cytotoxic T cells，Tc)，具有杀伤靶细胞的功能；迟发性变态反应T细胞(Td)，有参与IV型变态反应的作用；放大T细胞(Ta)，可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；处女或天然T细胞(Virgin or Natural T cells)，他们和抗原接触后分化成效应T细胞和记忆T细胞；记忆T细胞(Tm)，有记忆特异性抗原刺激的作用。

其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4(cluster of differentiation 4)。通过与MHC II(主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex)递呈的多肽抗原反应被激活。MHC II在抗原递呈细胞(antigen presenting cells，APCs)表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI与抗原直接结合。T淋巴细胞还可进一步分为辅助／诱导T淋巴细胞(CD3+CD4+)、抑制／细胞毒T淋巴细胞(CD3+CD8+)、CD4+T细胞纯真亚群(CD4+CD45RA+／CD4+CD45RA+62L+)和记忆亚群(CD4+CD45RA-／CD4+CD45RO+)、功能亚群(CD28+)、激活亚群(CD38+、HLA-DR+)、凋亡亚群(CD95+)等。

T细胞是淋巴细胞的主要组分，T细胞的正常功能对人类抵御疾病非常重要。T细胞不产生抗体，其免疫应答是细胞免疫，如与靶细胞特异性结合，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞；释放淋巴因子，最终使免疫效应扩大和增强；辅助或抑制B细胞产生抗体。在抵御疾病感染、肿瘤形成中起重要作用。而B细胞是通过产生抗体起作用。抗体存在于体液里，所以B细胞的免疫作用叫作体液免疫。

淋巴细胞的平均寿命一般为7天左右，不能在体外较长时间的传代培养。因为淋巴细胞在体外培养时易于在短时间内死亡，所以难以开展需在体外长期培养的淋巴细胞生物学功能的研究。为了解决这个问题，国内外文献报道用EB病毒转染法使B淋巴细胞永生化，建立B淋巴细胞系(株)，以满足上述科研的需要。建立这种永生B淋巴细胞系的原理基于B淋巴细胞表面有EB病毒的受体。而T淋巴细胞的表面没有EB病毒的受体，所以就无法用该方法来建立永生化T淋巴细胞系。至今未见有关可在体外长期传代培养的T淋巴细胞系的建立方法。

国外文献报道，猴肾病毒40(SV40)可以使某些人类细胞发生永生化。Poulin DL、Kung AL和Sullivan CS等研究表明，SV40T抗原基因的导入能加快转化细胞的生长速率，永生化细胞在体外多次传代后，仍具有相对稳定的增殖特性和功能状态，同时也能保留其原始细胞的许多分化表型，可以用于转基因动物模型及人类和动物某些种类的细胞模型的建立，据此可以借助于研究转基因永生化细胞及动物模型而在体外研究原始细胞的特性，从而研究其发病机制。