[发明专利]一种化学发光测定磺胺二甲嘧啶的方法

摘要

本发明公开了一种化学发光测定磺胺二甲嘧啶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）液态组分1的制备；（2）液态组分2的制备；（3）制备HRP（辣根过氧化物酶）修饰的R1；（4）制备HRP修饰的R2；（5）磺胺二甲嘧啶的检测。本发明的含有聚乙二醇的化学发光体系具有更低的毒性、更高的闪点和更低的蒸气压这些优良特性，具有更好的贮存稳定性。本发明的精确性和特异性强、灵敏度和稳定性高、污染小，成本低、检测简便快捷。通过检测液态奶中磺胺二甲嘧啶的含量并利用加标回收法对该方法进行了考察，回收率在98.0%～100.3%之间，表明此方法在复杂基底中测定磺胺二甲嘧啶具有良好的准确度。

主权项

一种化学发光测定磺胺二甲嘧啶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）液态组分1的制备：将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后，加入250 μl 0.01M 草酸酯、0.5×10^‑5 M的催化剂和至少0.0001M 荧光剂，在37°C下反应12小时；将所得的功能化磁性金纳米粒子用磷酸盐缓冲液洗涤，然后分散在磷酸盐缓冲液中，保存在5°C下备用；（2）液态组分2的制备：将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后，120 μl 1.0×10^‑5 M的溶于聚乙二醇的过氧化氢，在37°C下反应12小时；将所得的功能化磁性金纳米粒子用磷酸盐缓冲液洗涤，然后分散在磷酸盐缓冲液中，保存在5°C下备用；（3）制备HRP（辣根过氧化物酶）修饰的R1：在150 μl 1.0×10^‑5 M的甘氨酸、50 μl 0.003M的DTPA和80 μl 0.006M的苯甲酸钠混合液中加入15 mg NHS（N‑羟基琥珀酰亚胺），在37 °C下搅拌2小时，然后加入130 μl HRP，在37 °C下搅拌24h；（4）制备HRP修饰的R2：在120 μl 1.0×10^‑5 M的3‑ 氯‑4 羟基乙酰苯胺、130 μl 0.5×10^‑5 M四水合过硼酸钠中加入12 mg NHS，在37 °C下搅拌1小时，然后加入100 μl HRP，在37 °C下搅拌24h；（5）磺胺二甲嘧啶的检测：取含磺胺二甲嘧啶的标准溶液80 μL加入到220 μL的液态组分1溶液，37°C反应50分钟，然后混合物在磁力架上分离，将上清液转移到液态组分2溶液中；然后加入含有 2.0×10‑7 M HRP‑R1和 3.0×10‑7 M HRP‑R2溶液250 μL，在 37 ℃反应 2 h后进行磁分离，除去上清液，将磁珠用 120 μL磷酸缓冲溶液清洗两遍后，分散于1.0 ml磷酸缓冲溶液中，然后进行化学发光检测。