[发明专利]一种复合种子细胞的组织工程神经的制备方法

摘要

本发明公开了一种复合神经诱导的骨髓间充质干细胞的组织工程神经的制备方法，在Sondell制备法的基础上，采用改良的酶-低渗-化学除垢剂三联萃取神经，在体外构建具有生物活性的组织工程周围神经，然后复合在体外培养、扩增和神经分化诱导骨髓间充质干细胞。本发明克服了目前较为认可的化学制备方法Sondell法在一定程度上对神经基膜管和细胞外基质结构的破坏作用，减少其了对轴突再生的影响。本发明所制备的复合神经诱导的骨髓间充质干细胞的组织工程神经可应用于制备神经移植物，对周围神经缺损修复效果良好。

主权项

一种复合神经诱导的骨髓间充质干细胞的组织工程神经的制备方法，其特征在于，包括以下操作：1）取离体的异种动物的外周神经组织，剔除其中的神经外血管、脂肪及结缔组织之后，用胰蛋白酶处理；胰蛋白酶处理完成后终止消化，使用低渗处理液对神经组织进行低渗处理；2）将低渗处理后的神经组织在SB‑10溶液中震荡浸泡12h以上，清洗后转入含有Triton X200和SB‑16的混合液中震荡浸泡12h以上，清洗后得到脱细胞神经基质；3）用含体积分数10～20%的胎牛血清和1～5μmol／Lβ‑巯基乙醇的DMEM‑F12培养基预诱导传代后的骨髓间充质干细胞12～24h，无菌冲洗，然后培养基更换为含质量分数1～2%二甲基亚砜和体积分数10～20%的胎牛血清的DMEM‑F12培养基，诱导培养12～24h；4）将脱细胞神经基质用DMEM‑F12培养基充分浸润，吸干培养基后37℃孵育，然后接种诱导培养后的神经诱导骨髓间充质干细胞，添加DMEM‑F12培养，并补充胎牛血清至体积分数为10～20%，于37℃、5%CO2、95%湿度的条件下培养48小时，得到复合神经诱导的骨髓间充质干细胞的组织工程神经。