[发明专利]一种固定化酶水解降低蛋清蛋白致敏性的方法

摘要

一种固定化酶水解降低蛋清蛋白致敏性的方法，首先用磁珠固定化交联蛋白酶，然后利用固定化蛋白酶水解蛋清蛋白，水解液经活性炭脱腥后在60-70℃下进行真空浓缩，再利用冷冻干燥得到含水量小于5%的蛋清蛋白粉。本发明所得蛋清蛋白粉致敏性低，且含有大量的肽类和人体所需的氨基酸，极易被人体吸收，无不良风味；具有良好的推广和应用前景，可广泛用于食品、药品等领域，特别适用作过敏患者的食品原料。

主权项

一种固定化酶水解降低蛋清蛋白致敏性的方法，其特征是按以下步骤：(1) 生物素化标记蛋白酶的制备：称取一定量的生物素，用适量pH5.5、0.02M PBS缓冲液溶解，按生物素与1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺、N‑羟基琥珀酰亚胺摩尔比为1:3:3比例混合，于室温下反应1.5 h；以木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、Flavourzyme风味蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶中任意一种酶溶于磷酸盐缓冲液中配制蛋白酶溶液，将活化的生物素与蛋白酶摩尔比3:1比例混合，调整至酶最适pH值，于4℃下反应过夜后，用PBS缓冲液透析除去未反应的生物素，透析产物加入甘油于‑20℃下保存备用；(2) 链霉亲和素偶联磁珠：取一定量的羧基化的磁珠，依次用无水乙醇、NaOH、HCl 及PBS缓冲液洗涤后，用PBS缓冲液重悬磁珠，按磁珠表面羧基与1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺、N‑羟基硫代琥珀酰亚胺摩尔比为1:3:3分别加1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺以及N‑羟基硫代琥珀酰亚胺，37℃振荡反应2 h 活化磁珠表面羧基。