[发明专利]一种测定富含蛋白质样品中四环素类抗生素残留的方法

摘要

本发明提供了一种检测富含蛋白质样品中四环素类抗生素残留的方法，该方法用胰蛋白酶溶液酶解法除蛋白质，消除了生物基质样品中蛋白质对测定四环素的干扰，避免了采用沉淀法除蛋白带来的损失，前处理步骤简单、快速，选用固相萃取技术对样品进行浓缩和净化，所用有机溶剂用量少，可有效防止样品间的交叉污染，具有回收率高，精密度好等特点，可适用于鸡饲料、动物组织的富含蛋白质的生物质样品中四环素类抗生素的检测，克服现了现有检测四环素类抗生素方法回收率严重偏低，不能满足分析要求的不足。

主权项

一种测定富含蛋白质的样品中四环素类抗生素的方法，包括以下步骤：(1)绘制相应的四环素类抗生素液相色谱串联质谱法标准曲线。(2)取待测的含蛋白质的液体样品或含水分的含蛋白质的固体样品或干燥的含蛋白质的固体样品用lowery法测定样品中蛋白质的含量。(3)酶解法除蛋白：称取经步骤(2)测得蛋白质含量的待测的含蛋白质的样品，按所称取样品中蛋白质摩尔量五十分之一的比例加入胰蛋白酶溶液，80W超声8min或100W超声酶解6min或120W超声4min，得到酶解液；(4)四环素类抗生素提取：向步骤(3)得到的酶解液中加入提取剂，用以提取样品中四环素类抗生素，再用盐酸调pH为2至3，然后离心收集上清液，所述的提取剂是柠檬酸‑乙二胺二钠(Mcllvaine‑Na2EDTA)缓冲液；(5)净化上清液：将步骤(4)得到的上清液通过亲水亲油固相萃取聚合小柱(HLB柱)分离，萃取富集收集洗脱液，过滤后得滤液；(6)利用高效液相色谱测定步骤(5)得到的滤液中的四环素抗生素浓度：将液相色谱仪中得到的峰面积代入步骤(1)所作标准曲线中，求得抗生素浓度。