[发明专利]一种动物血液中超氧化物歧化酶提取技术新工艺

摘要

本发明涉及一种动物血液中超氧化物歧化酶提取技术新工艺，其特征在于，所述工艺包括以下步骤：（1）分离血球；（2）除血红蛋白；（3）热变性，上清液加热到65℃，保温10min，然后迅速冷却到室温，3000r/min离心20min，弃去沉淀物，收集上清液；（4）沉淀，清液在盐冰浴中冷却，然后在-5℃以下的操作温度下，加入1.5倍量预冷丙酮，边加边搅拌均匀，即有白色沉淀产生；（5）SOD的纯化，采用热变性—等电点—丙酮分级沉淀合用的方法，首先将SOD粗提液先在55℃下处理15min，然后调节pH值至其等电点3～4，最后加入终体积为1.0%的丙酮，收集沉淀。向沉淀中加入去离子水，溶液即为SOD提纯液；采用DEAESepha-dexA-50层析柱进行纯化，纯化产物即为SOD精品液。

主权项

一种动物血液中超氧化物歧化酶提取技术新工艺，其特征在于，所述工艺包括以下步骤，（1）分离血球 取新鲜动物血，加入到3.8%柠檬酸三钠抗凝液中，新鲜动物血与抗凝液的比例为3：1，轻轻搅拌均匀，4 000r/min离心20min，收集红血球； （2）除血红蛋白 红血球用3倍体积生理盐水洗涤，4 000r/min离心20min，重复三次，然后向洗净的红血球加入1～1.1倍体积去离子水，搅拌溶血30min，再向溶血液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，剧烈搅拌15min左右，静置1h，然后 4 000r/min离心20min除去变性血红蛋白沉淀，取清液，过滤，收集滤液； （3）热变性 上清液加热到65℃，保温10min，然后迅速冷却到室温，3 000r/min离心20min，弃去沉淀物，收集上清液； （4）沉淀 清液在盐冰浴中冷却，然后在‑5℃以下的操作温度下，加入1.5倍量预冷丙酮，边加边搅拌均匀，即有白色沉淀产生，静置2～3min，迅速抽滤，弃去滤液得肉色沉淀;沉淀物用少量蒸馏水溶解，4 000r/min离心20min，除去不溶物，用pH7.6的 2.5mmol/L K2HPO4‑KH2PO4缓冲液透析，即得粗SOD溶液；（5）SOD的纯化，采用热变性—等电点—丙酮分级沉淀合用的方法，首先将SOD粗提液先在55℃下处理15min,然后调节pH值至其等电点3~4,最后加入终体积为1.0%的丙酮,收集沉淀；向沉淀中加入去离子水,溶液即为SOD提纯液；采用DEAE Sepha‑dexA‑50层析柱进行纯化,纯化产物即为SOD精品液。